[发明专利]生物药非共价结合聚合物延长治疗浓度的方法及用途

说明书

发明领域

本发明涉及一种携带亲和配体的聚合物及与物药非共价结合物的方法和试剂，属于生物制药领域。

发明背景

蛋白类药物，具有靶点明确、疗效显著、不易形成抗药性、副作用小的优点，但因其体内半衰期较短，因此临床应用时，为维持其在体内的有效血药浓度，需要多次给药，患者依从性较差。为了解决这个问题，欧洲专利EP0539167和美国专利US4904584公开了用PEG直接修饰蛋白的解决方案。PEG单元可以共价联接到蛋白质的多个不同氨基位点上；由于蛋白或多肽分子中存在多个氨基，制备的共价偶联物是多种偶联产物的混合物，不同分子大小及分子结构的PEG对活性位点的影响不同，在特异性、被修饰后的蛋白空间结构、产物稳定性及产物活性等反面存在很大不均一性。偶联物位置异构体的混合物[欧洲专利EP593868；Monkarsh等，ACS.Symp.Ser.，680：207-216，1997]，需要繁琐的纯化步骤准备最适偶联物。专利PCT/US2004/025864中公开了一种在IL28和IL29分子N-末端上的氨基进行PEG化的均一化方法，控制反应pH条件选择性控制诸如醛(如甲氧基聚乙二醇丙醛)等试剂在N-末端的α氨基上反应，而不影响赖氨酸残基的ε氨基，制备蛋白质N-末端修饰产物。较未修饰的生物药，PEG偶联物具有较高的可溶性、稳定性、较弱的免疫原性；但尽管连接到药物蛋白分子氨基酸残基上的PEG链本身并不参与受体的识别与结合，但是PEG链的空间位阻以及PEG化导致的蛋白分子表面性质的改变影响了与受体的结合，降低了修饰后蛋白的活性；随PEG链长度增加和PEG修饰度提高，生物活性降低幅度增大。如PEG-IL-15只有10％的天然活性[中国专利申请201110095641.6]；(Peginterferon α-2b，Schering-Plough)只有天然活性约10％28％，PEGASYS(IFNα-2a)只有约7％天然活性。

此外，蛋白质PEG化修饰的化学反应、产物不均一性需要纯化不仅增加了生产步骤，造成了产品损失，加大了生产成本。因此需要发展稳定和延长药物血药有效浓度的更理想方法。

发明内容

本发明涉及一种携带亲和配体的高分子聚合物，物药能够以非共价形式与之结合形成非共价结合物；制备操作简单，活性损失小，易于保存，更稳定，与天然物药比较，具有更长的体内半衰期和有效血药浓度、用药次数少、治疗效果长、用药更为安全。

具体地说，本发明在于提供一种带亲和配体的高分子聚合物，物药通过非共价形式与之结合形成非共价结合物，可以加赋形剂、非离子表面活性剂等，过滤除菌、分装，如果需要可以冻干存放。因此该高分子聚合物有望开发成为一种保健产品或药物或者辅佐药物而用于临床。

因此，本发明的一个目的在于提供一种药物-高分子聚合物的非共价聚合物。

其特征在于：

[1]高分子聚合物分子上含共价连接的亲和配体；

[2]高分子聚合物在药物制剂阶段加入，混匀、除菌、过滤后形成。

[3]所述的药物包括但不限于重组生物药、提取生物药和合成生物药。

本发明中所述物药-高分子非共价结合物具有如下通式：

BioPM…Ligand一Polymer

式中，所述非共价结合物的优选摩尔比为：BioPM∶Ligand一Polymer＝0.5-1.5∶0.5-2∶5

式中，BioPM为所述的生物药指蛋白/多肽类药物：包括促红细胞生成素(EPO)、重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、疫苗、干扰素(INF)、生长激素(GH)、胰岛素(Insulin)、表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子(TGF-B)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板生长因子(PDGF)、内皮生长因子(ECGF)、神经生长因子(NGF)、骨衍生性生长因子(BDGF)、骨形成蛋白(BNIP)、组织多肽抗原(TPA)、抗体(antibody)、凝血因子VIII(VIII)及IX遗传因子和用于治疗的蛋白质或多肽。

BioPM为所述的生物药指蛋白/多肽类以外的药物为：反义核苷酸(anti-RNA)、小分子RNA(RNAi)、基因(DNA)、抗体、疫苗、或脂质体。

所述的生物药可以是天然的、重组蛋白或同样具有天然功能的基因突变产物，当然，也包括通过组织培养、有机合成的、蛋白质合成、细胞培养(天然、重组细胞活突变体)方法得到的产品。