[发明专利]高效表达重组细菌素的基因工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种细菌素E50-52基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.含有权利要求1所述细菌素E50-52基因的重组表达载体。

3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为pET-SUMO-E50-52，SUMO为小分子泛素样修饰蛋白。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体的构建方法为合成权利要求1所述的细菌素E50-52基因，将合成的细菌素E50-52基因克隆到T载体上，构建T-E50-52载体，以T-E50-52载体为模板，以引物F和引物R为引导进行PCR，将PCR产物克隆至融合表达质粒pET-SUMO上，构建重组表达载体pET-SUMO-E50-52；

其中，引物F的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，引物R的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

5.含有权利要求2-4任一项所述重组表达载体的宿主细胞。

6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌Mach1^TM-T1^R或BL21(DE3)。

7.根据权利要求6所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞的构建方法为将权利要求2-4任一项所述重组表达载体转化大肠杆菌Mach1^TM-T1^R或BL21(DE3)细胞。

8.一种制备重组细菌素E50-52的方法，其特征在于，所述方法为权利要求6或7所述大肠杆菌BL21(DE3)经IPTG诱导表达，实现SUMO-E50-52融合蛋白在大肠杆菌中的表达，再利用特异性的SUMO蛋白酶对融合蛋白进行切割，经Ni-NTA Sepharose色谱柱分离纯化，获得重组细菌素E50-52。

9.权利要求8所述方法制备的重组细菌素E50-52在制备抗菌药物、抗病毒药物、饲料添加剂、防腐剂或消杀剂中的应用。

10.权利要求8所述方法制备的重组细菌素E50-52在制备治疗动物肠道疾病的药物中的应用。