[发明专利]一种测定低聚半乳糖平均聚合度的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种测定平均聚合度的方法，尤其适用于测定低聚半乳糖的平均聚合度。

背景技术

低聚半乳糖（Galactooligosaccharides，GOS）是一种功能性低聚糖，主要具有如下的生理功能：促进双歧杆菌的增值，改善矿物质元素的吸收和防止骨质减少，预防、治疗便秘；改善脂质代谢，降低血清胆固醇的含量；生成营养物质，改善营养状况。我国卫生部已经批准GOS为新资源食品，允许添加在婴幼儿食品、乳制品、饮料、焙烤食品、糖果中。

在生产中，以乳糖为原料，通过β-半乳糖苷酶的转糖苷作用生产的GOS，所以GOS的分子结构一般是在半乳糖或葡萄糖分子上连接1~7 个半乳糖基，即Gal-(Gal)n-Glc/Gal(n为0~6)。因此，商业化的GOS通常会是葡萄糖、半乳糖、乳糖、半乳二聚糖、半乳三聚糖、半乳四聚糖和半乳五聚糖的混合物。影响形成的低聚糖结构和比例的主要因素依赖于生产使用的β-半乳糖苷酶的来源和生产工艺。目前已经测得的GOS不同聚合度的糖苷键结构式超过15种。

GOS组分较多，用外标法检测GOS时，存在不清楚其中有几种组分，购买不到标准品等问题。所以，美国AOAC官方公布的标准方法——AOAC2001.02中采用来源于米曲霉的β-半乳糖苷酶把乳糖和GOS水解，利用离子色谱检测水解前和水解后样品中的半乳糖、乳糖的含量，然后用总水解液中半乳糖含量减掉样品中游离的半乳糖和乳糖水解来源的半乳糖含量，计算出来源于GOS的半乳糖含量，再通过对样品中GOS的平均聚合度计算得到样品中GOS的含量。在实际检测中，由于GOS组分的复杂性，GOS的聚合度没有办法准确得到，因此不适合实际使用。

发明内容

本发明的目的是提供一种测定低聚半乳糖平均聚合度的方法，可准确检测出低聚半乳糖的平均聚合度。

本发明提供了一种测定低聚半乳糖平均聚合度的方法，包括：

1）取低聚半乳糖样品，用超纯水溶解后用微孔滤膜过滤，得到待测液；

2）使用钙型阳离子交换柱对待测液进行高效液相色谱法检测，并根据检测结果计算得到低聚半乳糖样品中半乳糖、葡萄糖、二糖、三糖、四糖和聚合度为5及以上的多糖的百分比含量；

3）使用氨基柱对待测液进行高效液相色谱法检测，并根据检测结果计算得到二糖中乳糖、半乳二糖和异乳糖的百分比含量；

4）由公式R₂=[（r_半+r_异）/（r_半+r_乳+r_异）]×r₂计算聚合度为2的低聚糖在总糖中的百分比含量，式中：R₂为聚合度为2的低聚糖在总糖中的百分比含量；r_半为半乳二糖在二糖中的百分比含量；r_异为异乳糖在二糖中的百分比含量；r_乳为乳糖在二糖中的百分比含量；r₂为二糖在总糖中的百分比含量；