[发明专利]一种用于肺癌预后评价的基因检测试剂盒及其制备与用途

说明书

技术领域

本发明涉及肺癌临床预后评价中相关基因表达的检测试剂盒，以及该试剂盒制备及其在肺癌临床预后评价和临床指导用药中的用途。本发明涉及的肺癌预后密切相关的5个基因，即蛋白激酶C iota、五次跨膜单链糖蛋白Prominin1、乙醛脱氢酶1、乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2和八聚体结合转录因子4，可用于肺癌预后评价和指导患者的临床用药。

背景技术

目前，肺癌是人类常见的恶性肿瘤，严重威胁着人类的生命。随着疾病的进展，肺癌患者的临床预后也在不断发生变化。在肺癌进展的不同阶段，患者临床预后表现也不一样，临床上用药会发生改变。但肺癌由于缺乏基础检验指标而难以在做出准确的预后评价和临床用药。

肺癌预后是很差，严重影响了患者生活质量和生存期。日前研究肺癌预后与基因的表达水平密切相关。如关键基因蛋白激酶C iota、五次跨膜单链糖蛋白Prominin1、乙醛脱氢酶1、乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2和八聚体结合转录因子4的高表达在维持肺癌的自我更新、增殖分化、侵袭和耐药性等方面发挥重要的作用。肺癌细胞的分化程度和更高的恶性生物学行为转化也与这些基因密切联系在一起。

目前，还没有专门针对肺癌预后密切相关基因进行检测的成熟产品和方法。本发明针对世界范围内已报道的肺癌表达基因，应用表面等离子共振检测技术发明了检测肺癌预后密切相关的5个基因的试剂盒产品及其制备方法，分别为上述5个关键基因，可以快速、有效、准确、经济地检测出5个肺癌预后评价相关基因表达水平，为肺癌预后的临床预后和临床用药提供指导性的评价。

发明内容

肺癌预后是个在疾病进展过程中涉及自我更新、增殖分化、侵袭转移、耐药性及恶性转化等相关基因的变化，这些基因表达与肺癌的发生和发展密切相关。本发明遴选出与肺癌预后密切相关的5个关键基因，其中分别为蛋白激酶C iota(protein kinase C iota，PKC iota)、五次跨膜单链糖蛋白Prominin1(PROM1)、乙醛脱氢酶1(aldehyde dehy肺癌ogenase1，ALDH1)、乳腺癌耐药蛋白ATP结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette transporter G2，ABCG2)和八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor4，OCT4)。

PKC iota过量表达为肺癌细胞迁移、侵润和抗失巢凋亡所需，也证实在肺癌干细胞转化中起重要作用。PROM1具有使肺癌细胞成集落能力，赋予肺癌细胞自我更新、增殖分化、侵袭和耐药性的能力，是肺癌干细胞的重要标志物。ABCG2与肺癌的侵袭能力、非小细胞肺癌分化程度以及更高恶性生物学行为相关，也是肺癌干细胞的重要标志物。肺癌细胞中表达ALDH1阳性，与肺癌患者的预后呈负相关。肺癌干细胞的分子标记OCT-4在维持肺癌细胞的侵袭、克隆形成、耐药方面有着重要作用。通过提取肺癌肿瘤组织总RNA并进行聚合酶链式反应(PCR)检测基因表达状况，该5个关键基因其中2个以上的都过表达，表明肺癌患者预后变差和肿瘤恶性程度增强，需要靶向这些基因的抑制剂治疗或干扰基因表达，将有助于肺癌患者预后好转。

本发明涉及一种检测肺癌预后评价相关基因的试剂盒，其特征在于，包括与肺癌预后密切相关的5个基因多重PCR扩增引物。

本发明涉及一种检测肺癌预后评价相关基因的试剂盒，包括与肺癌预后密切相关的5个基因多重PCR预扩增引物，其序列如下：

本发明涉及一种检测肺癌预后评价相关基因的试剂盒，还包括固定了与肺癌预后密切相关的5个基因探针的芯片，通过标记探针的生物素与包被芯片的链霉亲和素结合进行固定，其探针序列如下：

本发明还提供一种检测肺癌预后评价相关基因的试剂盒制备方法。该试剂盒包括：人肿瘤组织DNA提取液、PCR扩增反应液、阴性对照、阳性对照和DNA杂交液；

其中，人肿瘤组织DNA提取液包括：去离子水，6M NaI，氯仿/异戊醇混合液，异丙醇和无水乙醇；

PCR扩增反应液包括：10×PCR缓冲液，2U-5U的Taq酶，0.2～1.0mM的dNTPs以及权利要求1所述的5个基因的多重PCR引物混合物，该扩增引物混合物的用量分别都为0.2μmol；

阴性对照为DEPC去离子水；

阳性对照为构建的5个基因质粒DNA；