[发明专利]抗小麦黄花叶病毒的簇毛麦4VS染色体的特异分子标记

权利要求书

1.簇毛麦4VS染色体的特异性分子标记，其特征在于选自标记CINAU66和标记CINAU295中的任意一种；

标记CINAU66的引物序列为：CINAU66F：SEQ ID NO.1，CINAU66R：SEQ ID NO.2，用标记CINAU66的引物从含有簇毛麦4VS染色体的抗病植株中能扩增出约950bp的特异条带；

标记CINAU295的引物序列为：CINAU295F：SEQ ID NO.3，CINAU295R：SEQ ID NO.4，用标记CINAU295的引物从含有簇毛麦4VS染色体的抗病植株中扩增出约380bp的特异条带。

2.权利要求1所述的簇毛麦4VS染色体的特异性分子标记引物，其特征在于选自CINAU66F/CINAU66R或CINAU295F/CINAU295R中的任意一对，引物CINAU66F序列为：SEQ ID NO.1，引物CINAU66R序列为：SEQ ID NO.2，引物CINAU295F序列为：SEQ ID NO.3，引物CINAU295R序列为SEQ ID NO.4。

3.权利要求1所述的分子标记在鉴定含簇毛麦4VS染色体小麦中的应用。

4.权利要求1所述的分子标记在分子标记辅助选择育种中的应用。

5.权利要求2所述的分子标记引物在鉴定含簇毛麦4VS染色体小麦中的应用。

6.权利要求2所述的分子标记引物在分子标记辅助选择育种中的应用。

7.利用权利要求2所述的分子标记引物标记抗小麦黄花叶病毒的簇毛麦4VS染色体的方法，包括以下步骤：

（1）以待鉴定材料的DNA作为模板，用权利要求2所述的分子标记CINAU66或CINAU295的引物进行PCR扩增；

PCR扩增体系为：含20-100ngDNA的1μL DNA模板，1.0μL10×PCR buffer，0.8μL MgCl₂，0.8μL dNTP，左、右引物各0.2μL，0.15μL Taq DNA polymerase，5.85μL ddH₂O；

PCR程序为：94℃预变性3分钟；94℃变性30秒，55℃退火50秒，72℃延伸1分10秒，35个循环；72℃延伸10分钟；10℃保存；

PCR产物检测：PCR产物在丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺质量比39:1的非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离，再用银染法检测；

（2）两对标记引物鉴定簇毛麦4VS染色体的标准为：用标记CINAU66的引物进行PCR扩增，能扩增出约950bp特异条带的植株为含有簇毛麦4VS染色体的植株；用标记CINAU295的引物进行PCR扩增，能扩增出约380bp特异条带的植株为含有簇毛麦4VS染色体的植株。