[发明专利]基于DPO引物检测布氏杆菌的引物序列及其检测试剂盒

权利要求书

1.一种基于DPO引物检测布氏杆菌的PCR方法检测用引物对，其特征在于，

上游引物BO-DPOF：如序列表Seq No.1所示，

下游引物BO-DPOR：如序列表Seq No.2所示。

2.一种基于DPO引物检测布氏杆菌的PCR方法制备阳性对照品的PCR扩增引物，其特征在于，

上游引物BO-F：如序列表Seq No.3所示，

下游引物BO-R：如序列表Seq No.4所示。

3.一种基于DPO引物检测布氏杆菌的PCR方法阳性对照品pMD-T-Omp25，其特征在于，如序列表Seq No.5所示。

4.根据权利要求3所述的一种基于DPO引物检测布氏杆菌的PCR方法阳性对照品pMD-T-Omp25的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）、PCR模板的制备：布氏杆菌基因组DNA的提取和纯化；

（2）、选择布氏杆菌属（Brucella）Omp25基因作为靶基因，设计阳性对照品的PCR扩增引物：上游引物BO-F ，如序列表Seq No.3所示和下游引物BO-R，如序列表Seq No.4所示，并进行靶基因的PCR扩增；

（3）、阳性对照品pMD-T-Omp25的制备；

步骤（2）中，靶基因的PCR反应体系如下：

10×PCR Buffer 2.5μLdNTP (2.5mM for each)2.0μL上游引物BO-F (10μM)1.0μL下游引物BO-R (10μM) 1.0μLTaqDNA Polymerase(5U/μL)0.5μLDNA模板0.5μLddH₂O17.5μL

PCR的反应条件为：95℃ 5min；94℃ 30s、60.5℃ 45s、72℃ 45s，进行35个循环；72℃延伸10min，步骤（3）中，阳性对照品的制备过程，包括如下步骤：将步骤（2）中所得PCR产物与克隆载体pMD-19-T vector连接，转化大肠杆菌感受态JM109，获得阳性克隆菌株，并制备质粒pMD-T-Omp25作为阳性对照品。