[发明专利]一种双水相体系萃取葡萄籽中总黄酮的方法

说明书

技术领域

本发明属于一种天然产物有效成分的分离提取方法领域，特别涉及一种双水相体系萃取葡萄籽中总黄酮的方法。

技术背景

河西走廊地处北纬36度到40度之间，拥有生产优质酿酒葡萄的最佳光、热、水、土等资源，是我国乃至全世界有机葡萄酒的最佳产地之一。在葡萄酒加工过程中，每年产生约占葡萄加工量20-30%的大量皮渣废弃物，其中主要是葡萄皮、葡萄籽和果梗等。葡萄籽含有多种有效成分，主要有黄酮、蛋白质、多糖、原花青素。葡萄籽中的黄酮类成分具有扩张血管、增加外周血液循环和血流速度、降低血液中的胆固醇含量、改善胆固醇和磷脂比例等作用；能有效抑制血栓的形成，对冠心病、高血压及心脑血管疾病，并能极大地改善症状；能促进大脑循环代谢，改善记忆功能，对脑损伤的恢复及老年性痴呆都有积极的治疗和保健作用；具有抗菌消炎、抑制癌启动因子的作用，可提高人体免疫功能和抗衰老功能；具有强抗氧化、抗癌作用。从葡萄籽中提取的生物类黄酮与大多数黄酮相比，结构特殊，水溶性好，有效性高，生物利用度在90%以上，极易被人体吸收。因此对葡萄籽中黄酮类成分的提取分离研究是医药界的一个热门课题。

现有报道中，对植物中黄酮类化合物的提取分离方法，主要有溶剂提取法、树脂吸附法，也有超滤法及双水相提取法。双水相体系（ATPE）是将两种不同的水溶性聚合物的水溶液混合时，聚合物浓度达到一定值，体系自然地分成互不相容的两相，主要包括高聚物/高聚物双水相体系和高聚物/无机盐双水相体系。

本领域已知的是，双水相体系并非适合所有含有总黄酮类植物的萃取，即使是适合某些植物中总黄酮的提取，所述双水相体系中的试剂具体用量、浓度、pH等条件的变化，都对总黄酮的收率、时间等都有较大影响。因此仅有少量的如中国发明专利CN101396432A采用乙醇-硫酸铵双水相体系对香椿叶中的黄酮类物质进行分离提取的报道。另外，现有技术中对葡萄籽中总黄酮的提取一般都是用溶剂提取法，并未有人采用双水相体系对葡萄籽中总黄酮进行提取。尽管中国发明专利CN101125841A公开了一种葡萄籽黄酮的提取方法，采用溶剂提取法对其进行多次提取，3-5天可完成一次提取，收率为64%，但是用溶剂提取法提取葡萄籽中总黄酮，工艺周期长，提取率不理想，不利于工业化生产。

发明内容

本发明的目的是提供一种成本低、传质速率快、小试数据可直接放大、处理量大、收率高及可连续操作的双水相体系萃取葡萄籽中总黄酮的方法。

本发明的双水相体系萃取葡萄籽中总黄酮的方法，包括如下步骤：先将葡萄籽用乙醇提取制备葡萄籽粗提液；再将无水乙醇、硫酸铵、无机盐、水加入到所述葡萄籽粗提液中组成双水相体系，混匀，室温静置5-30min分层，得到上相（即乙醇相）和下相，取上相经减压浓缩并干燥，得到葡萄籽总黄酮；在双水相体系中，葡萄籽粗提液在体系中所占的质量比为5%-30%，所述无水乙醇在体系中所占的质量比为10%-30%，所述硫酸铵在体系中所占的质量比为16%-30%，所述无机盐在体系中所占的质量比为0-5%，余量用水补足至100%，所述双水相体系的pH为3.0-11.0。

本发明的“质量比”是指每个组分的质量与整个组分质量之和的比值。

本发明的“传质速率”是指单位时间传递物质的量kmol/s。

本发明的葡萄籽粗提液是优选按如下方法制得，但不应理解为对本发明的葡萄籽粗提液的限制，选用其他类似或本领域公知的提取方法，制得的葡萄籽粗提液均在本发明的保护范围之内：

将所述葡萄籽经过去杂、水洗、烘干、粉碎之后得到的葡萄籽粉末，然后加入相当于葡萄籽粉末体积6-10倍量的乙醇溶液，所述乙醇溶液的体积分数为30-70%，超声处理5-15min，超声功率为200-400W，将超声处理后的混合液过滤除杂。

本发明的“体积分数”是指乙醇溶液中的乙醇体积与整个溶液体积的比值。

优选的葡萄籽粗提液的制法是，是加入相当于葡萄籽粉末体积8倍量的乙醇溶液，所述乙醇溶液的体积分数为50%。

进一步优选的葡萄籽粗提液的制法是，在超声处理中，所用超声功率为325W、处理时间为10min。

本发明的双水相体系，当无水乙醇在体系中所占的质量比为19%-23%、硫酸铵在体系中所占的质量比为17%-24%、无机盐在体系中所占的质量比为0-2.5%、余量用水补足至100%时，能够取得更加效果。