[发明专利]一种核酸类药物靶向递送系统及其制备方法

说明书

技术领域    

本发明属于药物靶向递送领域。本发明提供了基于脂质类非病毒载体的核酸类药物的靶向递送系统。具体而言，本发明提供了核酸类药物-脂质类非病毒载体复合物的制备过程，以及该核酸类药物-脂质类非病毒载体复合物与特异性配基的连接方法。本发明的靶向递送系统的特异性来源于靶向性配基。本发明靶向递送系统能将siRNA、DNA、MicroRNA或CpG等核酸类药物靶向递送至靶细胞并进入其内部发挥作用。

背景技术

以小干扰RNA（small interference RNA, siRNA）、反义寡核苷酸 (antisense oligodeoxynucleotide, ASODN)和核酸刺激基序（CpG）为代表的小分子核酸类药物在基因治疗中占据着越来越重要的地位，部分药物已经通过FDA批准上市，目前更有多种核酸类药物处于临床前和临床试验。核酸类药物是指通过结合或裂解作用特异地针对致病基因或蛋白，从而抑制/促进某些的基因/蛋白表达的核酸序列，其包括一切可替换缺陷基因的人体正常基因，阻断基因表达的反义核酸或促进三链形成的单链核酸等，如siRNA、DNA、MicroRNA或CpG等。

作为治疗性药物，核酸类药物需进入靶细胞才能发挥治疗效果，而核酸分子全身给药进入机体后短时间内即可被酶类降解。因此，如何确保核酸分子以最有效率的方式，并保持完整状态地进入靶细胞，进而发挥其药物活性，即成为核酸类药物体内研究所要解决的首要难题。“包裹”与“靶向”无疑是解决这一难题的两大主要策略。

在“包裹”方面，目前多采用将核酸类药物包裹在病毒载体或脂质类非病毒载体内，可使药物的稳定性明显增加。其中脂质类非病毒载体主要包括阳离子脂质体、脂质类胶束、聚合物或高聚物、纳米粒等，非病毒载体相对于病毒载体具有低毒，低免疫原性等特点适合体内多次注射，且易于大量生产，其在基因治疗上具有很大的临床应用潜力。但应用于体内递送时，脂质类非病毒载体系统还存在包裹率低、转染效率不高以及易出现脱靶效应等问题，这些均限制了其推广和应用。因此提高递送系统靶向性及转染效率也成为核酸类药物所要解决的另一大难题。

为了增加脂质类非病毒载体的组织细胞靶向性，在“靶向”策略中，常用配基包括寡核苷酸类适配子、抗体分子、抗体片断、天然产生的受体表面结合物、多肽等。这些常用配基均具有靶分子范围广、特异性强、亲和力高、无或低免疫原性等显著优势而显示出巨大的应用潜力。

本发明人通过大量实验和创造性劳动，设计和构建出了性能稳定具有高靶向性和高递送效率的核酸类药物靶向递送系统。

发明内容

本发明的目的是在于提高核酸类药物在脂质类非病毒载体中的稳定性、靶向性和递送效率。使核酸类药物全身给药后能以有效量到达靶组织并进入靶细胞，保持其生物活性，进而为核酸类药物的实验研究和临床应用创造条件。

本发明提供了一种核酸类药物靶向递送系统，该系统包括：

（a）     脂质类非病毒载体；

（b）    包裹或装载于所述脂质类非病毒载体的一种或多种核酸类药物以及辅助分子，其中辅助分子作用在于控制所述核酸类药物体积，便于药物进入靶点内部，提高系统的递送效率；和

（c）     与所述脂质类非病毒载体直接复合或化学缀合的靶向性配基，所述靶向性配基的作用在于提高脂质类非病毒载体的靶向性。

本发明所述的核酸类药物靶向递送系统作用原理见图1。

本发明中，所述脂质类非病毒载体包括但不限于阳离子脂质体、脂质类胶束、聚合物或高聚物、纳米粒等。

在本发明中的一个实施方案中，其中所述的脂质类非病毒载体是脂质体，其主要含有磷脂和胆固醇。其中所述的磷脂为医用天然磷脂、合成磷脂或氢化磷脂，胆固醇为医用天然胆固醇或合成胆固醇。

在本发明中，所述核酸类药物通过被靶向至相应靶点发挥药物学活性，所述靶点包括但不限于基因序列、特定组织和细胞等。

本发明所述核酸类药物包括化学合成的核酸分子、修饰的核酸分子或通过Dicer酶降解产生的核酸分子，包括但不限于siRNA、DNA、MicroRNA和CpG等。

在本发明的一个优选实施方案中，其中所述siRNA的正义序列为 5’-GCA CTT GGC AAA GCC GCC C-3’。

在本发明的一个优选实施方案中，其中所述ODN是 5′-TAC CGC GTG CGA CCC TCT-3′。