[发明专利]抗肿瘤融合蛋白及其制备方法和用途

说明书

本发明公开了双功能抗肿瘤融合蛋白及其制备方法和用途。具体地，本发明公开了包含力达霉素辅基蛋白与内皮抑素的融合蛋白，所述融合蛋白可以用力达霉素发色团进行强化。还公开了重组产生所述融合蛋白的方法以及所述融合蛋白在治疗肿瘤中的用途。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及内皮抑素与力达霉素辅基蛋白的融合蛋白及其制备方法和用途。

背景技术

1971年Folkman教授(Folkman J.N Engl J Med.1971;285:1182-1186)提出肿瘤的生长依赖于血管新生。肿瘤组织中的新生血管为肿瘤生长提供营养和氧气，也是肿瘤侵袭和转移的主要途径。通常，良性肿瘤血管生成稀少，血管生长缓慢；而大多数恶性肿瘤的血管生成密集且生长迅速。因此，抑制血管新生能明显阻止肿瘤生长和扩散转移。近年来，针对肿瘤新生血管靶点的新抗癌药物(如贝伐单抗、索拉非尼、舒尼替尼)已经进入临床应用，并取得了良好的疗效。除此之外，作为内源性血管生长广谱抑制剂，内皮抑素(Endostatin)在小鼠体内可达到93％～97％的肿瘤抑制率，成为最引人注目的抗血管生成药物之一。内皮抑素是胶原蛋白XVIII羧基末端的水解片段，分子量约为20KD，含有184个氨基酸(O’Reilly,etal.(1997);Cell88(2):277-285)。世界上首例血管内皮抑制素抗癌新药，新型重组人血管内皮抑素——恩度(Recombinant human endostatin，rh-Endosmtin，Endostar)是在天然Endostatin的N-末端引入附加氨基酸序列MGGSHHHHH组成的，于2006年7月在中国上市开始临床使用，并且对晚期肺癌显示出较好的疗效。内皮抑素能特异性地作用于旺盛增殖的血管内皮细胞，并在肿瘤部位选择性地富集，这表明其具有靶向治疗肿瘤的潜力。

力达霉素(Lidamycin，LDM)，又被称作C1027，是大分子肽类抗肿瘤抗生素家族的成员之一，分离自球链霉菌(Streptomyces globisporus)(Hu et al.,J Antibiot1988;41:1575-1579)。力达霉素分子由烯二炔类发色团和110个氨基酸的力达霉素辅基蛋白(Lidamycin apoprotein,LDP)非共价结合形成。其中发色团和辅基蛋白可以被拆分和重建，重建的分子保留与原始分子相似的、强烈的抗肿瘤生物学活性。LDP特异性结合很多肿瘤组织，其本身也具有抗肿瘤作用。

尽管血管抑制剂类药物如恩度和化疗药物联合使用是本领域常用的治疗方案，但本领域并没有关于内皮抑素和力达霉素联合使用的报道。

发明概述

在第一方面，本发明提供了一种分离的融合蛋白，其包含力达霉素辅基蛋白和内皮抑素。在一些实施方式中，所述力达霉素辅基蛋白包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述内皮抑素包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。在一些实施方式中，所述内皮抑素包含SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列。

本发明的融合蛋白中的所述力达霉素辅基蛋白和内皮抑素可以通过连接肽连接。在一些实施方式中，所述连接肽包含SEQ ID NO:3所示的序列。

在一具体实施方式中，本发明的融合蛋白包含SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。

本发明的所述融合蛋白可以用聚乙二醇修饰。在一实施方式中，所述聚乙二醇的分子量为20-40kD。在一具体实施方式中，所述聚乙二醇的分子量为20kD。本发明的所述融合蛋白可以用单甲氧基聚乙二醇进行修饰。在一具体实施方式中，所述融合蛋白用单甲氧基聚乙二醇丙醛进行修饰。

在一些实施方式中，本发明所述融合蛋白还与力达霉素发色团结合。

在第二方面，本发明还提供了多核苷酸，其包含编码本发明的融合蛋白的核苷酸序列。在一些具体实施方式中，本发明的多核苷酸包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:7所示的核苷酸序列。