[发明专利]一种槐耳多糖蛋白及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种槐耳多糖蛋白及其制备方法和用途。

背景技术

槐耳为多孔菌科真菌槐栓菌（Trametes robiniophila Murr.）的子实体，是一种重要的民间药用真菌，在中国具有1600余年的用药历史。Ainsworth真菌分类系统将其归属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、多孔菌科、栓菌属。槐耳子实体中等至较大，木栓质，无菌柄，生于槐、刺槐等阔叶树的树干上，分布于河北、陕西、辽宁、湖南、广西、福建等地，是一种可以导致树木心材腐朽的木腐菌。本品味苦、辛，性平无毒,有“治风”、“破血”、“益力”的功效，临床上用于治疗多种疾病。由于老龄中国槐日益稀少，槐耳药材资源濒于枯竭，难以满足临床用药需求，更无法满足工业化生产需求。为了解决槐耳的资源问题，启东盖天力药业有限公司经过长期的研究和实践，攻克了槐耳菌丝体大规模发酵难题，实现了菌丝体的工业化生产，并以槐耳菌质（槐耳菌丝体发酵物）提取物为原料开发了槐耳颗粒和槐杞黄颗粒等药品，满足了临床用药需求。

近年来大量的化学成分及药理活性研究资料证实槐耳菌质提取物的有效成分为槐耳多糖蛋白，其主要功效是治疗或辅助治疗肿瘤性疾病。然而，目前对于槐耳多糖蛋白的组成、结构及其制备方法研究很少，在化学成分研究方面仅有粗多糖的单糖组成及比例分析的文献报道，缺乏对其均一多糖的分离纯化和结构研究，如均一多糖蛋白所含的糖残基种类、比例、在主链中的排列次序等信息，而这些信息对于阐明槐耳菌质真正的药效成分、槐耳多糖蛋白的作用机制及构效关系等至关重要。同样在槐耳多糖蛋白的生物活性研究方面，多以粗多糖作为研究对象，缺乏应用均一多糖组分获得的体内、体外药理学研究数据，从而无法深入了解槐耳多糖蛋白与人体免疫细胞或肿瘤细胞表面相关多糖受体的作用过程，因而无法深入的阐明其作用原理。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明提供一种槐耳多糖蛋白及其制备方法和用途。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的。

一方面，本发明提供一种槐耳多糖蛋白，该多糖蛋白的单糖组成为岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖及甘露糖，其质量比为0.1：1.0：5.4：4.4：2.1：7.0。

优选地，所述多糖蛋白的重均分子量为7.0×10⁵-2.0×10⁶Da，优选为1.69×10⁶Da。

优选地，该多糖蛋白的制备方法包括如下步骤：

（1）将浓度为2%-20%（质量/体积），优选为8%（质量/体积）的槐耳菌质提取物（例如槐耳清膏）水溶液采用Sevage法去除游离蛋白，收集糖类部分；

（2）将步骤（1）得到的糖类部分加入无水乙醇中，使其形成醇浓度为55%-70%（体积），优选60%（体积）的糖溶液，离心，得到沉淀物；

（3）将步骤（2）得到的沉淀物加水溶解，过滤，浓缩、透析收集袋内部分；以及

（4）使用离子交换柱色谱对步骤（3）收集到的袋内部分进行分离，其中使用的洗脱液为0.85Mol/L-1.5Mol/L的NaCl水溶液，优选为1.0Mol/L的NaCl水溶液。

优选地，所述多糖蛋白的制备方法还包括对NaCl溶液洗脱得到的产品进行透析除盐的步骤。

优选地，所述多糖蛋白的制备方法还包括采用Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱对透析除盐后的产品进行分离纯化的步骤。

另一方面，本发明提供一种上述多糖蛋白的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

（1）将浓度为2%-20%（质量/体积），优选为8%（质量/体积）的槐耳菌质提取物（例如槐耳清膏）水溶液采用Sevage法去除游离蛋白，收集糖类部分；

（2）将步骤（1）得到的糖类部分加入无水乙醇中，使其形成醇浓度为55%-70%（体积），优选60%（体积）的糖溶液，离心，得到沉淀物；

（3）将步骤（2）得到的沉淀物加水溶解，过滤，浓缩、透析收集袋内部分；以及

（4）使用离子交换柱色谱对步骤（3）收集到的袋内部分进行分离，其中使用的洗脱液为0.85Mol/L-1.5Mol/L的NaCl水溶液，优选为1.0Mol/L的NaCl水溶液，即得。

优选地，所述制备方法还包括对NaCl水溶液洗脱得到的产品进行透析除盐的步骤。

优选地，所述制备方法还包括采用Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱对透析除盐后的产品进行分离纯化的步骤。

在一个具体实施方案中，所述制备方法包括如下步骤：