[发明专利]一种槐耳多糖蛋白及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种槐耳多糖蛋白，该多糖蛋白的单糖组成为岩藻糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖及甘露糖，其质量比为0.1：1.0：5.4：4.4：2.1：7.0；该多糖蛋白的制备方法包括如下步骤：

(1)将质量浓度为2％-20％的槐耳菌质提取物水溶液采用Sevage法去除游离蛋白，收集糖类部分；

(2)将步骤(1)得到的糖类部分加入无水乙醇中，使其形成醇体积浓度为55％-70％的糖溶液，离心，得到沉淀物；

(3)将步骤(2)得到的沉淀物加水溶解，过滤，浓缩、透析收集袋内部分；

(4)使用离子交换柱色谱对步骤(3)收集到的袋内部分进行分离，其中使用的洗脱液为0.85mol/L-1.5mol/L的NaCl水溶液；

(5)对步骤(4)NaCl水溶液洗脱得到的产品进行透析除盐；以及

(6)采用Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱对步骤(5)透析除盐后的产品进行分离纯化。

2.根据权利要求1所述的多糖蛋白，其特征在于，所述多糖蛋白的重均分子量为7.0×10⁵-2.0×10⁶Da。

3.根据权利要求1所述的多糖蛋白，其特征在于，所述多糖蛋白的重均分子量为1.69×10⁶Da。

4.根据权利要求1所述的多糖蛋白，其特征在于，在步骤(1)中，所述槐耳菌质提取物水溶液的质量浓度为8％。

5.根据权利要求1所述的多糖蛋白，其特征在于，在步骤(2)中，所述糖溶液的醇体积浓度为60％。

6.根据权利要求1所述的多糖蛋白，其特征在于，在步骤(4)中，所述洗脱液为1.0mol/L的NaCl水溶液。

7.一种权利要求1至6中任一项所述的多糖蛋白的制备方法，该制备方法包括如下步骤：

(1)将质量浓度为2％-20％的槐耳菌质提取物水溶液采用Sevage法去除游离蛋白，收集糖类部分；

(2)将步骤(1)得到的糖类部分加入无水乙醇中，使其形成醇体积浓度为55％-70％的溶液，离心，得到沉淀物；

(3)将步骤(2)得到的沉淀物加水溶解，过滤，浓缩、透析收集袋内部分；

(4)使用离子交换柱色谱对步骤(3)收集到的袋内部分进行分离，其中使用的洗脱液为0.85mol/L-1.5mol/L的NaCl水溶液；

(5)对步骤(4)NaCl水溶液洗脱得到的产品进行透析除盐；以及

(6)采用Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱对步骤(5)透析除盐后的产品进行分离纯化。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述槐耳菌质提取物水溶液的质量浓度为8％。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述糖溶液的醇体积浓度为60％。

10.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述洗脱液为1.0mol/L的NaCl水溶液。

11.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)准确称取槐耳菌质提取物槐耳清膏300g,加入适量蒸馏水将其稀释为质量浓度为8％的稀溶液，之后采用Sevage法去除游离蛋白，重复操作5次，收集糖类部分；

(2)向步骤(1)得到的槐耳菌质糖类部分中缓缓加入无水乙醇使其成为醇体积浓度为60％的糖溶液，4℃静置24小时后，以3000转/分钟的速度离心10分钟，沉淀，得到沉淀物；

(3)称取适量步骤(2)得到的沉淀物，将其溶解于150ml蒸馏水中，过滤，减压浓缩至体积50ml；透析收集袋内部分,以及

(4)使用DEAE-52离子交换柱色谱对步骤(3)收集到的袋内部分进行分离,采用1.0mol/L NaCl溶液进行洗脱，洗脱部分在浓缩后进行透析除盐，透析过程为对流水透析三天，蒸馏水透析两天；以及

(5)采用Sepharose CL-6B琼脂糖凝胶柱对步骤(4)得到的产品进行分离纯化，直至高效液相色谱法检测为纯品为止。

12.权利要求1至6中任一项所述的多糖蛋白在制备治疗肿瘤的药物中的用途。