[发明专利]荧光PCR技术检测PDS基因IVS7-2A>G突变的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种采用实时荧光聚合酶链反应技术(FQ-PCR)检测PDS基因IVS7-2A＞G突变的方法，其特征在于以PDS基因第7内含子倒数第2个碱基(IVS7-2A＞G)设计特异性野生型探针及突变型探针，野生型及突变型探针分别被标记上不同颜色的荧光，同时在PDS基因IVS7-2A＞G碱基两侧设计特异性扩增引物，对于检测样本，依据野生型与突变型探针在PCR扩增中产生的荧光颜色不同来判断样本是否存在突变。

2.一种用实时荧光PCR方法检测PDS基因IVS7-2A＞G突变的试剂盒，其特征在于试剂盒主要包括：PCR反应液，阴性质控品，阳性质控品。

3.根据权利要求1、2所述的方法及其试剂盒，其特征在于，PDS基因IVS7-2A＞G碱基上游设计正向扩增引物，在下游设计反向扩增引物，其长度均为10-30bp之间的核苷酸序列，能够扩增出含有PDS基因IVS7-2A＞G区域的长度为50-700bp的核苷酸片段，优选地，正向引物(SEQ ID NO：1)及反向引物(SEQ ID NO：2)为能扩增出含有PDS基因IVS7-2区域60-150bp片段的特异性核苷酸序列。

4.根据权利要求1、2所述的方法及其试剂盒，其特征在于，PDS基因IVS7-2A＞G区域设计野生型探针及突变型探针，其长度均为10-30bp之间的核苷酸序列。两种探针均覆盖PDS基因IVS7-2区域，其中野生型探针(SEQ ID NO：3)针对PDS基因IVS7-2A＞G野生型位点，突变型探针(SEQ ID NO：4)针对PDS基因IVS7-2A＞G突变位点。

5.根据权利要求1、2、3、4所述的方法及其试剂盒，其特征在于，PCR反应液中包含荧光检测物质。荧光检测物质为荧光探针，其中探针5’端标记荧光发生基团，3’端标记荧光淬灭基团。

6.根据权利要求1、2、3、4、5所述的方法和试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括下列内容：PCR反应液含有1XPCR Buffer、dNTP、Mg²⁺、Taq酶、去离子水、正向型引物、反向型引物、野生型荧光探针、突变型荧光探针。

7.根据权利要求1、2所述的方法及权利6所述的试剂盒，其特征在于待检测靶核酸样品来自被检测者的血液、唾液、羊水细胞或其它人体组织；阳性质控品为经过测序检验结果为PDS基因IVS7-2A＞G纯合突变型的组织、血液、或细胞系提取的DNA或含有相应序列的PCR产物或质粒载体；阴性质控品为蒸馏水、纯水、生理盐水、鲑鱼精子DNA；阴性质控品也可以为经过测序检验结果为PDS基因IVS7-2A＞G野生型的组织、血液、或细胞系提取的DNA或含有相应序列的PCR产物或质粒载体。