[发明专利]一种三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法

权利要求书

1.一种三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将三角帆蚌外套膜组织浸泡于4%多聚甲醛溶液中进行固定；

（2）将固定好的外套膜组织用1×PBS冲洗后，经上行梯度乙醇脱水，然后经透明、浸蜡、包埋、连续切片得到切片，再贴片于经多聚赖氨酸处理的载玻片上，40℃恒温箱烤片过夜，备染；

（3）烤好的切片用二甲苯脱蜡两次，每次均是脱蜡10 min，然后进行下行梯度乙醇复水，并用蒸馏水浸泡2 min；

（4）将复水后的切片放入苏木精中染色20～30 min，用自来水冲洗20 min后，放入1%（体积百分含量）盐酸乙醇溶液中分化褪色3 s；

（5）将步骤（4）中得到的切片再放入自来水流水中漂洗20 min，然后分别经过乙醇脱水Ⅰ、0.5%（质量百分含量）伊红乙醇溶液复染1 min、乙醇脱水Ⅱ；

（6）将步骤（5）中得到的切片用二甲苯透明两次，每次均是透明5 min，最后用中性树脂封片。

2.根据权利要求1所述的三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法，其特征在于，所述的三角帆蚌外套膜组织是指沿外套膜边缘向壳顶方向取得的宽0.5 cm、长1 cm的组织。

3.根据权利要求1所述的三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述的组织固定条件为温度4℃下固定过夜。

4.根据权利要求1所述的三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述的浸蜡操作所用的石蜡是指熔点为56～58℃的鳞片状切片石蜡。

5.根据权利要求1所述的三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述的上行梯度乙醇脱水具体步骤为：50%乙醇脱水45 min、70%乙醇脱水45 min、80%乙醇脱水45 min、90%乙醇脱水30 min、95%乙醇脱水30 min、第一次无水乙醇脱水30 min和第二次无水乙醇脱水30 min。

6.根据权利要求1所述的三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述的下行梯度乙醇复水具体步骤为：第一次无水乙醇处理2 min、第二次无水乙醇处理2 min、95%乙醇处理2 min、90%乙醇处理2 min、80%乙醇处理2 min、70%乙醇处理2 min和50%乙醇处理2 min。

7.根据权利要求1所述的三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法，其特征在于，步骤（5）中所述的乙醇脱水Ⅰ具体步骤为：50%乙醇脱水2 min、70%乙醇脱水2 min、80%乙醇脱水2 min、90%乙醇脱水2 min。

8.根据权利要求1所述的三角帆蚌外套膜组织切片的制备方法，其特征在于，步骤（5）中所述的乙醇脱水Ⅱ具体步骤为：95%乙醇脱水2 min、第一次无水乙醇脱水2 min和第二次无水乙醇脱水2 min。