[发明专利]一种地衣芽孢杆菌7172及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种地衣芽孢杆菌7172及其应用。 

背景技术

香兰素（vanillin），学名4-羟基-3-甲氧基苯甲醛，分子式C₈H₈O₃，相对分子量152.15。香兰素的纯品通常为白色或微黄色针状结晶，具有香荚兰豆特有的芳香味。微溶于水，易溶于乙醇、氯仿、乙醚、冰醋酸、吡啶等有机溶剂和强碱溶液中。香兰素的化学性质不太稳定，易受光的影响，在空气中逐渐氧化为香草酸，在碱性溶液中易变色。无毒，对人和动物无害，对皮肤和粘膜有局部的刺激。 

香兰素是一种世界上产量最大、用途最多的广谱型高档香料，已广泛应用于食品、医药、工业、农业等各个行业中。在食品方面，因其具有特殊的香型，被誉为“食品香料之王”，广泛用作咖啡、名酒等高档食品的调香原料。在医药方面，香兰素是合成许多药物及其药物中间体的重要原料。在工业方面，香兰素被广泛的应用于牙膏、香水及化妆品的制备中；香兰素用作电镀添加剂，可加快电镀速度，增加镀件表面的光泽。在农业方面，香兰素可作为农作物的增产剂、催熟剂等。 

香兰素目前主要由化学方法制备，但用化学合成法制得的香兰素不是天然香料。天然香兰素可以从香子兰的花荚中提取，但这样得到的香兰素量少而价高，不能满足日益增长的需求，从而促使研究人员去寻找生产天然香兰素的替代方法。国外（例如欧洲）的立法机构认为采用生物活细胞或其中的组成部分（例如酶）等生物资源所生产的物质均属于天然产物。因此利用生物转化法生产天然香兰素是很有前途的替代方法之一。 

目前，利用微生物转化法生产香兰素所选用的天然底物主要有阿魏酸、丁香酚、异丁香酚、芳香族氨基酸、香草酸等。阿魏酸因其对微生物的毒性作用小，并且在自然界广泛分布，被认为是一种较好的底物。 

迄今为止，以阿魏酸为底物生产香兰素的微生物种类很多，在细菌、真菌、放线菌中都有发现。但大多数微生物转化得到的香兰素的产量很低，或者是香兰素很快转化成其它的代谢产物，导致香兰素在培养液中很难积累下来。 

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种地衣芽孢杆菌7172及其应用。 

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下： 

一种地衣芽孢杆菌，分类命名为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）7172，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.7172，保藏日期2013年1月18日，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

地衣芽孢杆菌7172的生理学特征是：革兰氏阳性，好氧，产芽孢，平坦，不透明，可利用麦芽糖、淀粉、葡萄糖。 

取地衣芽孢杆菌7172的16S rRNA序列与Bacillus licheniformis 的16S rRNA序列比对，相似性达到100%，因此鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis） 

所述的地衣芽孢杆菌在生物转化阿魏酸生产天然香兰素中的应用。

所述的应用，其特征在于，包括以下步骤： 

（1）斜面培养：将地衣芽孢杆菌7172接种到斜面培养基上，在50℃、pH7条件下，静置培养24h；

（2）制备种子培养液：用步骤（1）所得到的斜面培养物，接种到种子液培养基中，在50℃条件下，200rpm振荡培养24h，连续转接1～3次，制得种子培养液；

（3）菌体的发酵培养：使用步骤（2）所得的种子培养液，按体积百分比1%的接种量接入发酵培养液中，在50℃条件下，200rpm振荡培养20h；

（4）菌体的收集：将步骤（3）所得到的发酵液在6000rpm的条件下离心，弃上清，得到沉淀物，即菌体；

（5）菌体的转化：将步骤（4）所得的菌体用磷酸盐缓冲液冲洗三次，再用相同的磷酸盐缓冲液进行悬浮培养，同时加入8g/L的阿魏酸钠溶液，在50℃条件下，200rpm振荡培养5d，获得天然香兰素。

所述斜面培养基配方为：酵母提取物 5g/L，Tryptone 10g/L，氯化钠 5g/L，琼脂18g/L。 

所述种子液培养基配方为：酵母提取物5g/L，Tryptone 10g/L，氯化钠 5g/L。 

所述发酵培养基配方为：酵母提取物 5g/L，Tryptone 10g/L，氯化钠 5g/L；pH调至7。