[发明专利]一种复合检测戊型肝炎病毒抗体谱的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学检测领域，具体地说，是一种利用流式微球检测技术复合检测戊型肝炎病毒抗体谱的试剂盒。

背景技术

戊型肝炎(Hepatitis E，HE)是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)引起的经消化道传播的急性传染病，发病率逐年升高，目前尚无特效治疗方法。戊型肝炎广泛流行于亚、非及美洲一些国家，发病例呈全球性分布，是发展中国家较常见的传染病，我国为高发区。当成人感染HEV后，会出现尿黄、眼睛黄、皮肤黄发热，乏力、食欲减退、厌油、恶心、呕吐、上腹不适、肝区痛关节痛等症状。病情严重的病人可发生暴发性肝功能衰竭，肝昏迷，弥漫性血管内凝血等危及生命的并发症，孕妇感染HEV后，病死率高（5%～25%），还会造成流产和死胎。

目前，HEV病毒的检测方法主要有核酸检测和免疫学检测。HEV RNA 检测是临床戊型肝炎诊断的金标准，但该方法操作复杂、成本高，不易在临床广泛开展，而且在急性戊型肝炎患者中，血液或粪便中HEV RNA存在的时间较短，所以临床HEV的诊断主要依靠血液HEV抗体检测。抗HEV IgM是HEV急性感染的诊断指标之一，在感染HEV第2周就可以在血清中被检测到，第6周达到高峰，随后迅速下降，阳性持续时间较短（3个月左右），因此抗HEV IgM现有诊断试剂常有漏诊和误诊。这部分漏诊的带毒者即成为HEV的移动传染源，有可能是造成HEV区域性小规模流行和持续散发的原因。此外，类风湿因子等的存在会影响血清IgM的检测，造成假阳性，这在其他疾病检测中屡见不鲜，抗-HEV IgM检测也不例外。这说明现有的IgM诊断试剂尚不能满足HEV感染的临床诊断和流行病学筛查与防治的需要。抗HEV IgG一般在发病2周后可检测到，在第7周达到高峰，并能一直保持在较高的水平，可持续1年甚至数年，因此抗HEV IgG检测是目前HEV病毒感染诊断主要依据。但是抗HEV IgG不能鉴别患者为HEV急性感染还是既往感染。有研究表明IgG抗体亲和力高低测定可诊断是否为急性感染，通常感染初期IgG亲和力低，恢复期IgG亲和力高，但重复感染患者通常也表现为IgG亲和力高。这种情况在孕妇弓型虫感染患者中也有报道。虽然抗体亲和力能用来区分感染时间，特别是亚临床和无黄疸的患者，也可以鉴定抗HEV IgM阴性的急性感染，但高和低亲和力的区分不得不凭经验，而且不是所有急性感染都是抗-HEV IgG亲和力都低，也有的患者发病早期抗HEV IgG阳性，而亲和力高，因此抗体亲和力实验只能作为一种验证实验。人体感染HEV后3～4周，首先出现抗HEV IgM和IgA，此后约l周即可检测到抗HEV lgG。IgA抗体被证实在一些病毒性疾病的急性感染期升高，可以作为早期诊断的标志。在大部分HEV早期感染患者中，可检测到抗HEV IgM和抗HEV IgA阳性，但抗HEV IgA阳性持续时间比抗HEV IgM长，平均约为（120±23）d，对HEV感染的早期诊断更有意义。

流式微球技术(cytometric bead array，CBA)是流式细胞技术与微球相结合的一项新技术，是近年发展起来的一种定量检测细胞分泌或裂解释放的细胞因子或其他可溶性蛋白的重要方法，与传统的ELISA方法相比，CBA 具有EL ISA 所无法比拟的优点。CBA 的技术原理是利用有机高分子微球为载体，用特异性抗原/抗体(捕获抗体) 进行包被，再与标准品/或待检样本及荧光素标记的特异性抗原/抗体(检测抗体)一起反应，然后用流式细胞仪对其进行定量检测。如果将多种荧光强度具有明显差异的微球, 分别用不同抗原的特异性抗体包被，将包被好的微球(捕获微球) 混合, 并与标准/或待检样本及荧光素标记的特异性检测抗体一起反应, 可对样本中的多种可溶性蛋白质同时进行定量。该技术在液相环境中进行，可保持蛋白质构象不变，有利于抗原抗体结合，且有高通量、快速分析多重生物反应、高的灵敏度和特异性等传统ELISA无法比拟的优越性，已广泛应用于医学领域。

中国专利文献CN102375052A公开了一种在同一体系中检测IgM抗体和IgG抗体的方法，但是关于一种利用流式微球检测技术复合检测戊型肝炎病毒抗体谱的试剂盒目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种复合检测戊型肝炎病毒抗体谱的试剂盒。

本发明的再一目的是，提供一种复合检测戊型肝炎病毒抗体谱的试剂盒的应用。

本发明的另一的目的是，提供一种利用流式微球检测技术复合检测同一体系中戊型肝炎病毒抗体谱的方法。