[发明专利]一种复合检测戊型肝炎病毒抗体谱的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种复合检测戊型肝炎病毒抗体谱的试剂盒，其特征在于，包括以下组分：

a)捕获微球，所述的捕获微球为包被有不同HEV特异性抗原的聚苯乙烯微球，所述的HEV特异性抗原为HEV病毒基因组ORF 2和ORF 3重要抗原位点融合表达的戊肝抗原；

b)荧光标记的三种二抗，其中三种二抗为针对人HEV IgG、IgM、IgA抗体的二抗，所述的三种二抗标记的荧光基团各不相同；

c)磷酸缓冲液。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的a中HEV特异性抗原为人HEV IgG、IgM和IgA抗原。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的a中聚苯乙烯微球为羧基表面微球。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的b中的三种二抗为羊抗人IgG、羊抗人IgM、羊抗人IgA，荧光基团选自FITC，PE，PI，CY5，preCP、ECD中的三种。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的c中磷酸缓冲液的浓度 0.01mol/L，pH7.4。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的a中捕获微球的制备方法为：将偶联液、洗涤液、封闭/储存液放置到室温备用，所述偶联液为NaH₂PO₄ 0.1mol/L，pH6.2，所述洗涤液为PBS 0.01mol/L，pH7.4，所述封闭/储存液为PBS+1%BSA+0.02％NaN₃；①取微球用洗涤液冲洗；②加入活化缓冲液和EDC和NHS活化剂，混匀；③室温下避光摇震；④向活化的微球中加入HEV特异性抗原，混匀；⑤室温下避光摇振；⑥用洗涤液冲洗；⑦加入封闭液；⑧室温下避光摇震；⑨将包被好的微球放在储存液中4℃避光保存。

7.根据权利要求1-6任一所述的试剂盒在制备检测戊型肝炎病毒抗体谱的检测器械中的应用。

8.一种利用流式微球检测技术复合检测同一体系中戊型肝炎病毒抗体谱的方法，其特征在于，包括以下步骤：

    a) 捕获微球的制备，所述的捕获微球为包被有三种不同HEV特异性抗原的聚苯乙烯微球，所述的HEV特异性抗原为人IgG、IgM和IgA抗原；

b) 待检样品的处理：在同一反应器中，加入待检样品、捕获微球、不同荧光标记的三种二抗，孵育后形成微球-抗体-荧光二抗夹心复合物，其中三种二抗为针对人HEV IgG、IgM、IgA抗体的二抗；

c) 检测和结果判读：用流式细胞仪对经过孵育产生的微球复合物进行分析检测，通过分析三种荧光信号结果可获知待检样品的戊型肝炎病毒抗体谱。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的b中的三种二抗为羊抗人IgG、羊抗人IgM、羊抗人IgA，所述的荧光基团选自FITC，PE，PI，CY5，preCP、ECD中的三种。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的a中捕获微球的制备方法为：将偶联液、洗涤液、封闭/储存液放置到室温备用，所述偶联液为NaH₂PO₄ 0.1mol/L，pH6.2，所述洗涤液为PBS 0.01mol/L，pH7.4，所述封闭/储存液为PBS+1%BSA+0.02％NaN₃；①取微球用洗涤液冲洗；②加入活化缓冲液和EDC和NHS活化剂，混匀；③室温下避光摇震；④向活化的微球中加入HEV特异性抗原，混匀；⑤室温下避光摇振；⑥用洗涤液冲洗；⑦加入封闭液；⑧室温下避光摇震；⑨将包被好的微球放在储存液中4℃避光保存。