[发明专利]在基因转变活跃的细胞中实现遗传多样化的方法

权利要求书

1.其基因转变完全或部分被超变所取代的遗传修饰型淋巴细胞，其中所说的细胞在编码RAD51蛋白的平行进化同源物和类似物的基因中没有有害突变。

2.依照权利要求1的细胞，其中所述细胞包含野生型同源重组活性。

3.依照权利要求1或2的细胞，其中所述细胞具有未受影响的增殖速率。

4.依照权利要求1至3中任一项的细胞，其中所述细胞是能进行DNA修复的。

5.依照权利要求1至4中任一项的细胞，其中所述细胞是表达免疫球蛋白的B细胞。

6.依照权利要求1至5中任一项的细胞，其中所述细胞来源于鸡、绵羊、牛、猪或兔。

7.依照权利要求1至6中任一项的细胞，其中所述细胞是鸡法氏囊淋巴瘤细胞。

8.依照权利要求1至7中任一项的细胞，其中所述细胞是DT40细胞或其衍生物。

9.依照权利要求1至8中任一项的细胞，其中所述细胞表达活化诱导型脱氨酶(AID)。

10.依照权利要求1至9中任一项的细胞，其中所述细胞能够通过超变或超变和基因转变的联合而对靶核酸进行定向选择性遗传多样化。

11.依照权利要求10的细胞，其中所述靶核酸编码蛋白质或行使调控活性。

12.依照权利要求11的细胞，其中所述靶核酸编码免疫球蛋白链、选择性标记、DNA结合蛋白、酶、受体蛋白或它们的部分。

13.依照权利要求12的细胞，其中所述靶核酸是人免疫球蛋白V基因或其一部分。

14.依照权利要求11的细胞，其中所述靶核酸包含转录调控元件或RNAi序列。

15.依照权利要求10至14中任一项的细胞，其中所述细胞进一步包含至少一种能用作靶核酸基因转变供体的序列。

16.依照权利要求10至15中任一项的细胞，其中所述靶核酸通过靶向整合在确定位点处被整合入染色体中。

17.依照权利要求11至16中任一项的细胞，其中所述靶核酸与指导遗传多样化的调控核酸序列可操作性的连接。

18.依照权利要求11至17中任一项的细胞，其中所述细胞以有助于含有具所需活性的所述核酸突变体的细胞被选择的方式表达靶核酸。

19.依照权利要求11至18中任一项的细胞，其中的选择是对细胞内、细胞表面上或细胞外的靶核酸活性进行直接选择。

20.依照权利要求18的细胞，其中的选择是间接选择报导核酸的活性。

21.依照权利要求10至20中任一项的细胞，其中通过基因转变和超变进行的靶核酸遗传多样化是受遗传操作调控的。

22.依照权利要求21的细胞，其中的调控是通过顺式作用调控序列进行的。

23.依照权利要求21或22的细胞，其中的调控是通过改变基因转变供体的数目、方位、长度或同源程度而进行的。

24.依照权利要求20至23中任一项的细胞，其中的调控是通过反式作用调控因子进行的。

25.依照权利要求24的细胞，其中所述反式作用调控因子是活化诱导型脱氨酶(AID)。

26.依照权利要求24的细胞，其中所述反式作用因子是除了RAD51平行进化同源物或类似物之外的DNA修复或重组因子。

27.衍生自权利要求1至26中任一项所述细胞的细胞系。

28.含有其中基因转变全部或部分被超变所取代的淋巴细胞的非人转基因动物，其中所说的细胞在编码RAD51蛋白平行进化同源物和类似物的基因内无有害突变，且其中所说的细胞能通过超变或超变和基因转变的联合而对转基因靶核酸进行定向选择性遗传多样化。

29.制备能通过超变或超变和基因转变的联合而对靶核酸进行定向选择性遗传多样化的细胞的方法，包括(a)用含有靶核酸的遗传构建体转染能进行基因转变的淋巴细胞，并(b)鉴定其内源V基因或其片段被靶核酸取代的细胞。