[发明专利]含有天然胆固醇和赖氨酸类脂质阳离子有机功能分子及其脂质体、制备方法和应用

权利要求书

1.一种含有天然胆固醇和赖氨酸的类脂质阳离子有机功能分子，其化学结构可由通式(I)表示：

上式结构中，连接基团Linker选自：-(CH₂)₄-或-(CH₂)₅^-，A^-表示阴离子反离子部分：氯负离子、磷酸根负离子、甲磺酸根负离子或三氟乙酸根负离子。

2.一种根据权利要求1中所述的含有天然胆固醇和氨基酸的类脂质阳离子有机功能分子的合成方法，其特征是由以下两个步骤组成：

第一步：将烷基二醇溶于充分脱水干燥的有机溶剂中，在碱催化下缓慢滴加到事先溶于有机溶剂的胆固醇氯甲酸酯中，于0～50℃搅拌反应12～24h中间体胆固醇单取代二醇碳酸酯；上述反应中，碱、烷基二醇和胆固醇氯甲酸酯的摩尔比为0.05～0.1：4.0～6.0：1.0；

第二步：将BOC保护的天然赖氨酸砌块化合物溶于脱水干燥的有机溶剂中，在碱催化下缓慢滴加到溶于有机溶剂的第一步骤制备所得的中间体胆固醇单取代二醇中，加入一定量的缩合剂后于0～50℃搅拌反应12～24h，蒸馏除去有机溶剂，进行柱层析；然后产品溶于过量酸中室温搅拌反应1～2h，加醚沉淀后过滤干燥得到含有天然胆固醇和赖氨酸的类脂质阳离子有机功能分子；上述反应中，BOC保护的天然赖氨酸砌块化合物与胆固醇单取代二醇碳酸酯中间体的摩尔比为1.0：1.0～1.5；

所述的碱是三乙胺、氨水、碳酸钠、碳酸钾、氢氧化钠、氢氧化钾、吡啶或4-二甲氨基吡啶；所述的烷基二醇是丁二醇或戊二醇；所述的缩合剂为二环己基碳二亚胺、二异丙基碳二亚胺或羰基二咪唑;所述的过量酸为盐酸、磷酸、甲磺酸或三氟乙酸;所述的醚为乙醚、丙醚、异丙醚、丁醚、甲基叔丁基醚或甲基乙烯基醚；所述的BOC是碳酸二叔丁酯。

3.根据权利要求2中所述的一种含有天然胆固醇和氨基酸的类脂质阳离子有机功能分子的合成方法，其特征是步骤（一）中，所述的产物经过蒸馏除去有机溶剂；然后用有机溶剂柱层析分离纯化。

4.根据权利要求2中所述的一种含有天然胆固醇和氨基酸的类脂质阳离子有机功能分子的合成方法，其特征是步骤（一）和（二）中，所述的有机溶剂包括乙酸乙酯、四氢呋喃、1，4-二氧六环、二氯甲烷、三氯甲烷、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、甲醇、乙醇、乙醚、乙腈、丙酮、苯或甲苯；所述柱层析所用的有机溶剂包括乙酸乙酯、四氢呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇、乙醇、乙醚、乙腈或它们的混合溶剂。

5.根据权利要求2中所述的一种由天然胆固醇和氨基酸的类脂质阳离子有机功能分子的合成方法，其特征是步骤（一）中的反应温度为0～50℃；所述步骤（二）中的反应温度为0～50℃。

6.一种如权利要求1所述的含有天然胆固醇和赖氨酸的类脂质阳离子有机功能分子的应用，其特征是用于制备SiRNA转染试剂。

7.如权利要求6所述的一种含有天然胆固醇和赖氨酸的类脂质阳离子有机功能分子的应用，其特征是采用如权利要求1所述的含有天然胆固醇和赖氨酸的功能分子为制备原料，与二油酰磷脂酰乙醇胺混合制备脂质体制备含有天然胆固醇和赖氨酸的脂质体。

8.如权利要求7所述的一种含有天然胆固醇和赖氨酸的类脂质阳离子有机功能分子的应用，其特征是称取如权利要求1所述的含有天然胆固醇和赖氨酸的类脂质阳离子有机功能分子，然后加入摩尔比为1：1的二油酰磷脂酰乙醇胺与之混合,再将该混合脂质充分溶解于色谱级氯仿溶液中，二者的氯仿体积/混合脂质摩尔比为100～200：1；随后在旋转蒸发除去氯仿溶剂，形成一层均匀的脂质薄膜后，加入去离子水，去离子水和脂质薄膜的体积/摩尔比为100～200：1，超声水化0.5h～1h后得到一种含有天然胆固醇和赖氨酸的脂质体。

9.一种如权利要求7或8所述的一种含有天然胆固醇和赖氨酸的类脂质阳离子有机功能分子的应用，其特征是所述的含有天然胆固醇和赖氨酸的脂质体作为制备小分子干扰RNA基因输送载体的应用。