[发明专利]一种利用金纳米团簇测定糜蛋白酶活性的方法

权利要求书

1.金纳米团簇在测定糜蛋白酶活性中应用。

2.金纳米团簇在测定待测样品中糜蛋白酶含量中的应用。

3.一种利用金纳米团簇测定待测样品中糜蛋白酶含量的方法，包括如下步骤：

（a1）将糜蛋白酶标准品或待测样品与金纳米团簇混合，形成实验反应体系；同时设置与所述实验反应体系相比缺少所述糜蛋白酶标准品或所述待测样品的空白反应体系；将所述实验反应体系和所述空白反应体系在同一条件下进行反应，反应结束后分别测定所述实验反应体系和所述空白反应体系的荧光强度，计算得到所述实验反应体系和所述空白反应体系的荧光强度差值；

（a2）根据步骤（a1）得到的所述糜蛋白酶标准品的所述荧光强度差值绘制标准曲线，将所述待测样品的所述荧光强度差值代入所述标准曲线，从而得到所述待测样品中糜蛋白酶的含量。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述反应的温度为35℃-40℃；所述反应的pH为7-8.5；所述反应的时间为50min-70min。

5.金纳米团簇在监测糜蛋白酶水解底物蛋白中的应用。

6.一种利用金纳米团簇检测不同反应体系中糜蛋白酶对底物蛋白进行水解的反应速率快慢的方法，包括如下步骤：

（b1）将以底物蛋白作为保护基团的金纳米团簇与糜蛋白酶进行反应，形成不同的反应体系，反应过程中实时监测各反应体系的荧光强度；

（b2）根据步骤（b1）中实时监测到的各反应体系的荧光强度，按照如下方法确定所述不同反应体系中糜蛋白酶对底物蛋白进行水解的反应速率快慢：所述反应体系的荧光强度降低越快则相应反应体系中糜蛋白酶对所述底物蛋白进行水解的反应速率越快；所述反应体系的荧光强度降低越慢则相应反应体系中糜蛋白酶对所述底物蛋白进行水解的反应速率越慢。

7.一种利用金纳米团簇检测糜蛋白酶对底物蛋白进行水解的反应是否结束的方法，包括如下步骤：

（c1）将以底物蛋白作为保护基团的金纳米团簇与糜蛋白酶进行反应，反应过程中实时监测反应体系的荧光强度；

（c2）根据步骤（c1）中实时监测到的所述反应体系的荧光强度，按照如下方法确定所述糜蛋白酶对所述底物蛋白进行水解的反应是否结束：若所述反应体系的荧光强度随着反应的进行不再降低，则所述糜蛋白酶对所述底物蛋白进行水解的反应结束；若所述反应体系的荧光强度随着反应的进行一直在降低，则所述糜蛋白酶对所述底物蛋白进行水解的反应尚未结束。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：所述反应的温度为35℃-40℃；所述反应的pH为7-8.5。

9.根据权利要求1-8中任一所述的应用或方法，其特征在于：所述金纳米团簇的保护基团为蛋白质；所述蛋白质具体为牛血清白蛋白；所述底物蛋白为牛血清白蛋白。

10.根据权利要求4-9中任一所述的应用或方法，其特征在于：所述金纳米团簇中金原子与牛血清白蛋白的配比为10mmol：30g。