[发明专利]一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法

权利要求书

1.一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将纤维堆囊菌接种于M26培养基中，在25～35℃下摇床培养72～120h，得到种子液；

2）按100ml接种5～15ml的比例，将种子液接种至含有树脂的发酵液中，在25～35℃下摇床培养72～120h，在培养0～72h内向含有树脂的发酵液中添加前体物和/或小分子物质，所述的前体物为乙酸钠、丙酸钠、半胱氨酸中的一种或几种，小分子物质为甲基丙二酸、脂肪族类氨基酸、亚铁氰化钾、生物素中的一种或几种；

3）将培养后的发酵液过滤，收集树脂，树脂经水洗涤后再经甲醇振荡，得到含有埃博霉素B的浸提液。

2.根据权利要求1所述的一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法，其特征在于，所述乙酸钠、丙酸钠、甲基丙二酸的用量为0.25～7mmol/L，半胱氨酸及脂肪族类氨基酸的用量为40～80umol/L，亚铁氰化钾的用量为1×10^-5～3×10^-5mol/L，生物素的用量为1～10ug/L。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法，其特征在于，所述的脂肪族类氨基酸为蛋氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、天冬氨酸中的一种或几种。

4.根据权利要求3所述的一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法，其特征在于，在培养初始向含有树脂的发酵液中分别按5～8ug/L、40～60umol/L、30～50umol/L的量添加生物素、蛋氨酸和半胱氨酸。

5.根据权利要求3所述的一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法，其特征在于，在培养初始向含有树脂的发酵液中分别按5～8ug/L、40～60umol/L、30～50umol/L的量添加生物素、缬氨酸和半胱氨酸。

6.根据权利要求2所述的一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法，其特征在于，在培养初始向含有树脂的发酵液中按5～8ug/L的量添加生物素，发酵培养48h后分别按4～7mmol/L、4～7mmol/L、50～70umol/L的量添加乙酸钠、甲基丙二酸和半胱氨酸。

7.根据权利要求2所述的一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法，其特征在于，在培养初始向含有树脂的发酵液中按5～8ug/L的量添加生物素，发酵培养48h后分别按4～7mmol/L、0.3～3mmol/L、50～70umol/L的量添加乙酸钠、丙酸钠和半胱氨酸。

8.根据权利要求1所述的一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法，其特征在于，所述的含有树脂的发酵液中树脂的添加量为15～30ml/L，添加的树脂为大孔树脂XAD16。

9.根据权利要求1所述的一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法，其特征在于，步骤1）、2）所述的摇床培养振荡速度为150～180r/min；步骤3）所述的过滤为采用20～60目铁丝滤网夹筛过滤收集树脂。

10.根据权利要求1所述的一种基于埃博霉素B代谢途径的发酵生产方法，其特征在于，所述的发酵液中含有酵母粉20～50g/L、玉米淀粉1～5g/L、磷酸二氢钠1～2g/L、磷酸氢二钠1～2g/L、MgSO₄·7H₂O2～5g/L、FeSO₄·7H₂O0.1～0.5g/L、CaCl₂2～5g/L、MnCl₂0.1～0.5g/L和葡萄糖10～15g/L，调节pH值为7.2～7.5。