[发明专利]一种血液、尿液及组织中硝酸盐与亚硝酸盐的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物残留检测技术领域，具体涉及一种准确测定人或动物的血液、尿液及组织中硝酸盐与亚硝酸盐含量的方法。

背景技术

一氧化氮(NO)是一种重要的舒血管因子，低浓度NO使支气管平滑肌和肺血管舒张，它的有效释放对人体或动物维持正常的血管压力起着重要的作用。同时，NO还是一种重要的神经递质，在不同的中枢神经系统中扮演了重要和神秘的角色，几乎参与所有系统的生理过程调控和病理生理过程的发展，而在抑制血小板聚集、动脉粥样硬化、肌肉松弛、炎症、血压、免疫反应和心血管监管方面的作用尤为重要。但NO的化学性质非常活泼，在体内的半衰期仅为3～5s，极容易被氧化，在动物体内主要以硝酸盐(NO₃^-)、亚硝酸盐(NO₂^-)的形式存在。同时硝酸盐和亚硝酸盐还会来自于食品，植物性食品和动物源食品往往天然含有大量的硝酸盐，如果保存和处理不当，在硝酸盐还原酶作用下这些食品可能产生大量的亚硝酸盐。一次摄入过量的亚硝酸盐可以引起高铁血红蛋白血症，3个月以下儿童尤其敏感。同时，亚硝酸盐还能与食品中常见的有机胺类物质形成致癌性的N-亚硝胺化合物，从而威胁人体健康。因此，可以通过测定尿液、血液中的NO₃^-和NO₂^-的含量来反映体内NO含量和作为反应多项身体机能的重要指标。

目前，NO₃^-、NO₂^-的测定一般是通过硝酸还原酶法、镉柱还原法、离子色谱法、紫外分光光度法等来完成的。然而血液或尿液中NO₂^-含量低，因个体差异，血液或尿液中复杂的成分常常干扰实验结果，难以达到检测需求。现有技术中尚未见用HPLC同时准确测定尿液、血液及组织中的硝酸盐与亚硝酸盐含量的方法。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种稳定性好、干扰小、能同时准确测定血液、尿液及组织中硝酸盐与亚硝酸盐含量的方法。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现。

除非另有说明，本发明所采用的百分数均为重量百分数。

一种血液、尿液及组织中硝酸盐与亚硝酸盐的检测方法，包括以下步骤：

（1）硝酸盐、亚硝酸盐标准工作曲线制作：分别取浓度为200μg/mL的NO₃^-标准溶液0.20、0.4、0.6、0.80、1.00mL和浓度为20μg/mL的NO₂^-标准溶液0.20、0.4、0.6、0.80、1.00mL，分别稀释至5mL，分别得到浓度为8.0，16.0，24.0，32.0，40.0μg/mL的NO₃^-溶液和0.8，1.6，2.4，3.2，4.0μg/mL的NO₂^-溶液；加入150μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入150μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定；得到硝酸盐及亚硝酸盐回归方程、相关系数、相对标准偏差、回收率；

（2）样品检测：

尿液的检测：取10mL尿液，加入0.5～1.0g吸附剂，混合均匀，离心脱色，滤纸过滤除去吸附剂；取5mL脱色后的尿液，加入150μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入150μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定；所述吸附剂为：活性炭、硅镁吸附剂、海泡石、凸棒石、直链藻、硅藻土、硅胶、活性氧化铝或壳聚糖中之一种，用量0.5～1.0g；

血液的检测：取5mL新鲜血液，放入离心机中离心，取上清液，加入10%重量体积比的氢氧化钠溶液0.1mL和5%重量体积比的硫酸锌溶液1mL，离心分离，取上清液1mL加入50μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入50μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定；