[发明专利]一种血液、尿液及组织中硝酸盐与亚硝酸盐的检测方法

权利要求书

1.一种血液、尿液及组织中硝酸盐与亚硝酸盐的检测方法，包括以下步骤：

（1）硝酸盐、亚硝酸盐标准工作曲线制作：分别取浓度为200μg/mL的NO₃^-标准溶液0.20、0.4、0.6、0.80、1.00mL和浓度为20μg/mL的NO₂^-标准溶液0.20、0.4、0.6、0.80、1.00mL，分别稀释至5mL，分别得到浓度为8.0，16.0，24.0，32.0，40.0μg/mL的NO₃^-溶液和0.8，1.6，2.4，3.2，4.0μg/mL的NO₂^-溶液；加入150μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入150μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定；得到硝酸盐及亚硝酸盐回归方程、相关系数、相对标准偏差、回收率；

（2）样品检测：

尿液的检测：取10mL尿液，加入0.5～1.0g吸附剂，混合均匀，离心脱色，滤纸过滤除去吸附剂；取5mL脱色后的尿液，加入150μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入150μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定；所述吸附剂为：活性炭、硅镁吸附剂、海泡石、凸棒石、直链藻、硅藻土、硅胶、活性氧化铝或壳聚糖中之一种，用量0.5～1.0g；

血液的检测：取5mL新鲜血液，放入离心机中离心，取上清液，加入10%重量体积比的氢氧化钠溶液0.1mL和5%重量体积比的硫酸锌溶液1mL，离心分离，取上清液1mL加入50μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入50μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定；

组织匀浆的检测：取0.2g～1.0g组织块在生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重；量取3～5mL生理盐水于烧杯中，剪碎上述洗净的组织块，超声10min，使组织匀浆化；将制备好的匀浆放入离心机中离心，取上清液1mL，加入50μL GriessA试剂，混合均匀；1min后加入50μL GriessB试剂，混合均匀，放置5min后，进样10μL至液相色谱仪，经洗脱后，分别在220nm和510nm波长处进行测定。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（1）和（2）中所述的GriessA试剂为50mg对氨基苯磺酸溶于10%醋酸1.5mL和去离子水3mL；GriessB试剂为4mg N-1-萘乙二胺盐酸盐溶于10%醋酸4mL。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（1）和（2）中所述的洗脱，其流动相条件为乙腈：离子对试剂：甲醇体积百分比按表1条件进行梯度洗脱；

表1

其中，表1中所述的离子对试剂为氢氧化四丁基铵、溴化四丁基铵、溴化十六烷基三甲胺或氯化十六烷基三甲胺中的一种，浓度为体积比1%～5%pH4水溶液。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：样品检测中所述的离心条件为离心时间10～30min，离心速率4000～10000r／min。