[发明专利]杂交瘤细胞株AFM1B7、其单克隆抗体及黄曲霉毒素M1流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及杂交瘤细胞株AFM1B7、其单克隆抗体及黄曲霉毒素M1流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒。 

背景技术

黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉分泌产生的次生代谢产物，是能引起人畜各种损害的天然有毒化合物。黄曲霉毒素目前已发现20余种，主要包括黄曲霉毒素A1（AFA1）、B2（AFB2）、AFG和M1（AFM1）等。黄曲霉毒素M1（AFM1）是AFB1的羟基化代谢产物，哺乳动物摄入AFB1污染的饲料后，在体内经羟基化会分泌于乳汁当中。通常当动物摄入了AFB1污染的食物后，AFM1的排出量为AFB1摄入量的1%～3%。大量的研究者对AFM1的毒性和致癌性进行了深入的研究，研究结果也促使国际癌症研究机构将AFM1的致癌等级由二类致癌物质变为一类致癌物质。AFM1性质稳定，即使经过巴氏杀菌，也几乎完全不能被破坏。在许多乳制品中均含有AFM1。由于乳制品是婴幼儿食物的主要来源，因此AFM1污染问题引起了世界各国的广泛关注，并对AFM1进行了严格的限量。我国属于黄曲霉毒素污染较重的地区，因此加强乳及乳制品中黄曲霉毒素M1的检测、特别是速测，及时了解和掌握乳及乳制品的卫生信息，对保障我国食品消费安全具有重要意义。 

现有黄曲霉毒素的检测方法包括薄层层析法、精密仪器分析法和免疫学分析法。其中薄层层析法是较早用于检测黄曲霉毒素最常用的检测方法，该法不需要特殊的仪器设备，一般实验室都可进行，但试剂用量大、操作繁琐、其它组分干扰严重、准确性差，不能准确定量，且对实验人员和周围环境污染危害较大，不适于现场快速检测。精密仪器分析法主要包括荧光分光光度法和高效液相色谱法，这些方法灵敏度高，准确性好，但又有仪器昂贵，要求黄曲霉毒素样品纯化程度高，样品前处理过程繁琐，耗时长，对实验环境要求高等不足，难以实现快速检测。免疫分析技术克服了前两者的缺点，具有特异性强、灵敏度高、样品前处理简单、成本低、对实验人员和周围环境的污染危害小、适于现场批量检测等优点，已应用于食品、医疗等多个领域。 

发明内容

本发明所要解决的问题是提供杂交瘤细胞株AFM1B7、其单克隆抗体及黄曲霉毒素M1流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒。 

本发明提供了杂交瘤细胞株AFM1B7，该细胞株已于2010年7月13日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO.C201020。其具有序列表中SEQ ID No.1所示的单克隆抗体重链可变区编码基因序列和序列表中SEQ ID No.2所示的单克隆抗体轻链可变区编码基因序列。 

单克隆抗体，它由保藏编号为CCTCC NO.C201020的杂交瘤细胞株AFM1B7分泌产生。其重链可变区具有序列表中SEQ ID No.3所示的氨基酸序列；轻链可变区具有序列表中SEQID No.4所示的氨基酸序列。该单克隆抗体可以识别黄曲霉毒素M1，对黄曲霉毒素M1的50%抑制浓度IC₅₀为52pg/mL。 

黄曲霉毒素M1流动滞后免疫时间分辨荧光速测试剂盒，其特征在于：它包括荧光试纸条和含有铕标记的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体冻干品的样品反应瓶，其中：所述的荧光试纸条包括纸板，纸板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线上包被黄曲霉毒素M1-牛血清白蛋白偶联物(AFB1-BSA)；所述抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体为由保藏编号为CCTCC NO.C201020的杂交瘤细胞株AFM1B7分泌产生的单克隆抗体。 

按上述方案，所述铕标记的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体是按照以下方法制备得到的：将保藏编号为CCTCC NO.C201020的杂交瘤细胞株AFM1B7分泌产生的单克隆抗体（抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体）用碳酸盐缓冲溶液透析后和铕标记试剂以质量比为0.5～2:1的比例充分混匀后静置过夜，然后经Sephadex G-50层析柱分离铕标记的抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体，洗脱，收集目标产物。 

按上述方案，所述荧光试纸条中的吸水垫长15～20mm，宽3～4mm；检测垫长25～30mm，宽3～4mm；样品垫长12～18mm，宽3～4mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm。 

按上述方案，所述荧光试纸条中检测垫上的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15～20mm，质控线和检测线的间距为5～10mm；所述的样品反应瓶为1-5mL的卡口瓶。