[发明专利]用于结核菌的培养基和制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种培养基和制备方法，尤其是一种用于结核菌的培养基和制备方法。

背景技术

结核病是常见病，多发病是严重危害人体健康的乙类传染病，根据2000年我国结核病流行病学抽样调查结果分析，目前我国结核病疫情十分严重，呈现五多一高的特点，即结核病感染人数增多，全国已有4亿多人感染了结核菌；现患肺结核病人多，我国现有500万结核病人，其中200万具有传染性；结核病死亡人数多，我国每年因结核病死亡的人数约15万；耐药结核病人多，我国耐药病人高达46%；农村结核病人多，我国80%的结核病人在农村，老、少、边、穷地区更为严重；结核病疫情高，20年来，我国结核病疫情居高不下，并呈蔓延趋势。2000年以后，结核病的发病、耐药及死亡呈上升趋势，列各类传染病之首，因此防治结核病是一个十分重要的医疗课体。

 结核病的诊断及治疗是通过影像学检查及实验室查结核菌，影像学检查仅仅是参考指标，而诊断的依据是在病人体内找到结核菌，因此检验找到结核菌是确诊的关键，而找结核菌有两种方法：一是痰（分泌物）涂片染色后直接查结核菌，操作简便快速，但对于排菌少的病人不易查到，阳性率低（60%）。另一种方法为痰（分泌物）培养，阳性率可达90%特别对一些不典型排菌少的病例有较好效果。不论从结核病控制、流行病学调查和研究，还是从临床诊疗的角度看，分枝杆菌的分离培养都是结核病原学诊断的“金标准^①。同时，分枝杆菌的分离培养也为进行菌种鉴定和药物敏感性监测提供试验菌株，结核病明确诊断后的治疗，选择药物是关键，而选择药物就需要做药敏试验，通过药敏选择有效药物既能减轻病人负担又避免应用无效药物而引起的副作用，目前结核菌培养及结核菌培养+药敏最经典的方法是用改良罗氏培养基进行培养，改良罗氏培养基（Lowensten-Jensen，L-J）是由国际防痨协会和肺病联合会（International union Against Taberculosis and lung Disease，IUATLD）推荐，用的培养及与其它培养基相比，此培养基培养结核菌从开始培养到能看到明显结核菌菌落约需16-56天，药敏约需14-60天，因此培养周期较长。

发明内容

为了克服上述技术缺点，本发明的目的是提供一种用于结核菌的培养基和制备方法，因此缩短了结核菌的培养周期和对结核菌的治疗周期。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案是：一种用于结核菌的培养基，包含有标准配制改良罗氏培养基的1毫升和肌苷的10-15微克。

结核菌营养要求较高，在改良罗氏培养基上，结核菌处于低能缺氧状态，生长缓慢，由于肌苷能直接透过细胞膜进入细胞，使低能、缺氧静止状态的细胞恢复正常活动，因此缩短了结核菌的培养周期和对结核菌的治疗周期。

本发明设计了，用于分离培养和药敏试验的标准配制改良罗氏培养基即 改良L-J培养基设置为包含有KH₂PO₄  2.0-2.8g、MgSO₄.7H₂O 0.20-0.28g 、柠檬酸镁或枸橼酸镁0.4-0.8g、天门冬素3.2-3.9g、丙三醇10-14ml、蒸馏水400-800ml、马铃薯淀粉25-35g、新鲜鸡卵液800-1200ml、2%孔雀绿水溶液18-22ml。

本发明设计了，用于分离培养的标准配制改良罗氏培养基即酸性L-J培养基设置为包含有KH₂PO₄  12.0-16.0g、MgSO₄.7H₂O 0.20-0.28g 、柠檬酸镁或枸橼酸镁0.4-0.8g、天门冬素3.2-3.9g、丙三醇10-14ml、蒸馏水400-800ml、马铃薯淀粉25-35g、新鲜鸡卵液800-1200ml、2%孔雀绿水溶液18-22ml。

本发明设计了，一种标准配制改良罗氏培养基的制备方法，其特征是：其步骤为：

（1）基础液的配置：

把KH₂PO₄  2.0-2.8g或12.0-16.0g、MgSO₄.7H₂O 0.20-0.28g 、柠檬酸镁或枸橼酸镁0.4-0.8g、天门冬素3.2-3.9g、丙三醇10-14ml、马铃薯淀粉25-35g、蒸馏水400-800ml混合,加热溶解到蒸馏水中,在温度为110-131℃高压灭菌器中， 15-25min灭菌，冷却至室温后，在温度为2-6℃的冰箱保存待用；

（2 ）孔雀绿溶液的配置