[发明专利]用于结核菌的培养基和制备方法

权利要求书

1.一种用于结核菌的培养基；其特征是：包含有标准配制改良罗氏培养基的1毫升和肌苷的10-15微克。

2.根据权利要求1所述的用于结核菌的培养基其特征是：用于分离培养和药敏试验的标准配制改良罗氏培养基即 改良L-J培养基设置为包含有KH₂PO₄  2.0-2.8g、MgSO₄.7H₂O 0.20-0.28g 、柠檬酸镁或枸橼酸镁0.4-0.8g、天门冬素3.2-3.9g、丙三醇10-14ml、蒸馏水400-800ml、马铃薯淀粉25-35g、新鲜鸡卵液800-1200ml、2%孔雀绿水溶液18-22ml。

3.根据权利要求1所述的用于结核菌的培养基；其特征是：用于分离培养的标准配制改良罗氏培养基即酸性L-J培养基设置为包含有KH₂PO₄  12.0-16.0g、MgSO₄.7H₂O 0.20-0.28g 、柠檬酸镁或枸橼酸镁0.4-0.8g、天门冬素3.2-3.9g、丙三醇10-14ml、蒸馏水400-800ml、马铃薯淀粉25-35g、新鲜鸡卵液800-1200ml、2%孔雀绿水溶液18-22ml。

4.一种标准配制改良罗氏培养基的制备方法，其特征是：其步骤为：

（1）基础液的配置：

把KH₂PO₄  2.0-2.8g或12.0-16.0g、MgSO₄.7H₂O 0.20-0.28g 、柠檬酸镁或枸橼酸镁0.4-0.8g、天门冬素3.2-3.9g、丙三醇10-14ml、马铃薯淀粉25-35g、蒸馏水400-800ml混合,加热溶解到蒸馏水中,在温度为110-131℃高压灭菌器中， 15-25min灭菌，冷却至室温后，在温度为2-6℃的冰箱保存待用；

（2 ）孔雀绿溶液的配置

把 2%孔雀绿水溶液18-22ml、无菌蒸馏水80-120ml 混合，在无菌环境中将孔雀绿染料溶解在无菌蒸馏水里,温箱放置1-2小时助溶；孔雀绿溶液不能长期保存,如果出现沉淀或颜色变浅,都应废弃并制备新鲜溶液；

（3 ）全质卵液的匀化

 用刷子蘸温水和普通的碱性肥皂将不超过7天的并且为食用不含抗生素饲料的母鸡下的新鲜鸡蛋彻底刷洗，再将鸡蛋在肥皂夜里浸泡20-40min，用流动水彻底冲洗鸡蛋后，在75%乙醇中浸泡10-20min，晾干后使用，在无菌环境中制备匀化卵液，并用双层以上医用无菌纱布过滤取出不能匀化的膜状物；

（4 ）培养基的配制

    在无菌环境中，按 基础液400-800ml、孔雀绿溶液15-25ml、全质卵液800-1200ml 、肌苷的10-15微克 充分混匀，培养基溶液静置30-60min，然后分装在无菌试管内，注意拧紧盖子，每支试管内加量7-10ml，以培养基斜面高度占试管的2/3、且底部充满培养基为佳，培养基分装结束后，在10-20min内开始凝固，以防沉淀发生；

（5 ）培养基的凝固

培养基放入凝固器之前，先将凝固器温度升到80-90℃，培养基放入后，当温度达到80-90℃时开始计算时间，凝固45-55min后及时将培养基从凝固器中取出或以电动风机将其冷却，凝固好的培养基斜面颜色呈黄绿色，表年光滑无泡，具有一定韧性和酸碱缓冲能力；

（6 ）培养基的保存

在无菌试管上注明日期后分装于防潮包装内，在4℃冰箱内保存，放入前检查瓶盖是否闭封，以防止培养基干化和冰箱凝固水的渗入，培养基保存期不能超过4周。