[发明专利]一种促进表皮细胞增殖的方法及其应用

权利要求书

1.一种促进表皮细胞增殖的方法，是用链接粘附分子JAM1基因修饰和基因干扰表皮细胞，该方法包括：

A、构建JAM1RNA干扰的慢病毒；

B、将步骤A获得的慢病毒去感染表皮干细胞，获得JAM1低表达的表皮细胞。

2.根据权利要求1所述的一种促进表皮细胞增殖的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

A、构建JAM1RNA干扰的慢病毒：

JAM1基因干扰慢病毒质粒构建中合成片段如下：

pSCF4772-1如SEQ ID NO:9所示；

pSCF4772-2如SEQ ID NO:10所示；

退火成双链DNA并连接到酶切后的病毒载体pFU-GW-RNAi上，构建JAM1RNA干扰的慢病毒即pFU-GW-JAM1RNAi-GFP；

B、将pFU-GW-JAM1RNAi-GFP慢病毒颗粒感染表皮干细胞，获得JAM1低表达的表皮细胞，即JAM1^kd-EC，表皮细胞增殖加快。

3.根据权利要求2所述的一种促进表皮细胞增殖的方法，其特征在于，步骤B为：

（a）先将10μL三个不同梯度的病毒加到各组的相应孔中，加入的病毒量分别为5×10⁵TU，1×10⁵TU，1×10⁴TU，而细胞经过生长，此时细胞的数目大约为1×10⁴个，所以三个孔的MOI分别为50、10、1；

（b）每孔中加入10μL的Polybrene稀释液；

（c）在水平方向轻轻拍打培养板，使培养基和病毒等试剂充分混匀，然后把细胞板放回培养箱孵育；

（d）培养8~12h以后观察细胞状态，弃去细胞上清，更换为新鲜培养基；

（e）感染3~4天后，观察荧光表达情况，对于生长缓慢代谢慢的细胞，可以适当延长观察时间，中途可以换液，保持细胞的活性；

（f）通过细胞感染效果，确认MOI值为50可获得最佳感染效果。

4.一种链接粘附分子JAM1基因低表达的表皮细胞，其特征在于，是用以下方法制备得到的：

A、构建JAM1RNA干扰的慢病毒：

JAM1基因干扰慢病毒质粒构建中合成片段如下：

pSCF4772-1如SEQ ID NO:9所示；

pSCF4772-2如SEQ ID NO:10所示；

退火成双链DNA并连接到酶切后的病毒载体pFU-GW-RNAi上，构建JAM1RNA干扰的慢病毒即pFU-GW-JAM1RNAi-GFP；

B、将pFU-GW-JAM1RNAi-GFP慢病毒颗粒感染表皮干细胞，获得JAM1低表达的表皮细胞，即JAM1^kd-EC。

5.一种如权利要求1至3任一所述的促进表皮细胞增殖的方法在制备创面修复材料或皮肤移植物中的应用。

6.一种如权利要求4所述的链接粘附分子JAM1基因低表达的表皮细胞在制备创面修复材料或皮肤移植物中的应用。