[发明专利]一种嵌合受体及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说，本发明涉及一种新的嵌合受体以及该嵌合受体的制备方法和用途。

背景技术

恶性肿瘤是当今世界严重危害人类健康的疾病，在各种疾病所致死亡中高居第二位。近年来，恶性肿瘤发病率呈明显上升趋势，而且恶性肿瘤治疗效果差，晚期转移率高，预后多不佳。目前临床上常规治疗方法如放、化疗和手术治疗虽然在很大程度上缓解了病痛，延长了生存时间，但这些方法均存在很大的局限性，其疗效难以进一步提高。

近年来抗肿瘤免疫已成为肿瘤治疗的新热点。大多数的肿瘤抗原是自身抗原，异位表达或过表达于肿瘤细胞，能诱导免疫系统产生忽视、克隆清除和免疫耐受，从而阻碍机体产生抗肿瘤免疫反应。另外，肿瘤细胞还能通过降低肿瘤抗原和MHC分子的表达、分泌免疫抑制性的细胞因子等机制逃脱机体的免疫监视。即使肿瘤抗原能够被识别，并诱导产生肿瘤特异性的CTL，也必须有足够数量的CTL迁移到肿瘤部位发挥细胞毒作用，并要克服肿瘤细胞逃脱免疫监视的各种机制。过继性免疫治疗是通过给荷瘤机体输注抗肿瘤免疫效应细胞，如致敏或激活的淋巴细胞来杀伤肿瘤。但由于分离和培养足够数量的肿瘤特异性的淋巴细胞非常困难,以及实体肿瘤的屏障作用和注入体内肿瘤特异性抗体的快速清除，使得这种体液免疫在肿瘤免疫治疗中的作用受到很大的限制，采用这些方法治疗大多数实体肿瘤如结肠癌、乳腺癌时，并未取得满意的治疗效果。

表皮生长因子受体(EGFR)的信号传导途径是癌症发生发展的重要影响因素，在肿瘤细胞生长、凋亡和转移等过程中发挥重要作用。目前在多种实体瘤如肺癌、头颈癌、结肠癌、脑肿瘤中均发现EGFR的过表达。大量实验证明，EGFR可以作为肿瘤治疗的一个有效靶点。EGFR是表皮生长因子受体家族中的4成员之一，是一种跨膜糖蛋白，分子量约为170kD，由胞外区、跨膜区及胞内区3部分组成。EGFR的胞外区分成4个亚区，是EGFR与配体(生长因子等)结合的部位；跨膜区由一个亲脂性多肽螺旋构成；胞内区含有保守的酪氨酸激酶磷酸化位点。在非活性状态下EGFR是单体，当EGFR受体与其配体结合后可形成同源或异源二聚体，受体胞内区发生自我磷酸化可以启动一系列胞内信号级联。EGFR对细胞增殖起重要作用。

抗EGFR嵌合抗体是小鼠抗表皮生长因子抗体的可变区与人抗体G1重链和轻链恒定区的免疫球蛋白组成，特异性地与正常和肿瘤细胞的表皮生长因子受体（EGFR,HER1,c-ErbB-1）相结合，竞争性抑制表皮生长因子受体与其他配体的结合。其与生长因子受体的结合阻断磷酸化作用和与受体相关联激酶的活性，抑制细胞生长，诱导细胞凋亡，并减少基质金属蛋白酶和血管内皮生长因子的产生。动物体内体外试验表明抗EGFR嵌合抗体可抑制肿瘤细胞的存活和生长而抑制表皮生长因子受体的过度表达。

有研究者将抗体对肿瘤抗原的高度亲和性和T淋巴细胞的杀伤作用相结合，利用基因工程技术，构建嵌合型的人工T细胞受体（CARs），它包括识别肿瘤相关抗原的单链抗体、共刺激分子和T细胞的活化CD3ζ链，通过逆转录病毒载体，高效转染T淋巴细胞，使T细胞能以MHC非限制性的方式识别并杀伤肿瘤细胞。越来越多的证据表明，CD4+T细胞在肿瘤免疫治疗中发挥重要的作用，而肿瘤特异性的CD4+T细胞的获得非常困难。由于嵌合型的T细胞受体不仅能转染CD8⁺T细胞，还能转染CD4⁺T细胞，且两者均能被相应的抗原分子激活，因此在抗肿瘤免疫治疗中发挥重要的作用。

据Hiroshi报道，用CARs修饰的Th1细胞与Tc1细胞相比，能分泌更多的IL-2和IFN-γ等细胞因子，将Th1与Tc1联合应用，在BALB/c RAG-2^-/-小鼠体内获得协同治疗肿瘤的效果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种新的scFv-anti-EGFR-CD28-ζ嵌合受体，以克服现有技术的不足；

本发明要解决的第二个技术问题是提供编码上述嵌合受体分子的DNA分子，以克服现有技术的不足；

本发明要解决的第三个技术问题是提供一种携有scFv-anti-EGFR-CD28-ζ嵌合受体的逆转录病毒；

本发明要解决的第四个技术问题是提供一种scFv-anti-EGFR-CD28-ζ嵌合受体的制备方法；

本发明要解决的第五个技术问题是提供该嵌合受体的用途；

本发明的技术方案是这样的：