[发明专利]一种免疫检测用邻苯二甲酸酯塑化剂通用人工抗原的合成方法

权利要求书

1.一种免疫检测用邻苯二甲酸酯塑化剂通用人工抗原的合成方法，其特征在于：以邻苯二甲酸与6-(芴甲氧羰酰基-氨基)-1-己醇发生酯化反应，再脱去芴甲氧羰酰基保护基，形成半抗原，半抗原通过1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺EDC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS活化，或者通过三正丁胺与氯甲酸异丁酯活化，再与载体蛋白进行偶联，得到邻苯二甲酸酯塑化剂通用人工抗原，步骤如下：

（1）邻苯二甲酸酯类塑化剂通用半抗原的制备

取0.5～1g邻苯二甲酸，1mL6-(芴甲氧羰酰基-氨基)-1-己醇，钛酸四丁酯10μL，二环己基碳二亚胺DCC10mg，95℃反应12h，加入NaOH水溶液，中和反应液至pH7.4～8，分层后弃水相，有机相再洗涤一次，减压35℃旋蒸脱醇；在产物中加入10mL含20%哌啶的N,N-二甲基甲酰胺DMF溶液，室温反应20min，脱去芴甲氧羰酰基保护基团，得到邻苯二甲酸酯类塑化剂通用半抗原；

（2）邻苯二甲酸酯类塑化剂通用人工抗原的制备

取邻苯二甲酸酯类塑化剂通用半抗原加入N,N-二甲基甲酰胺DMF溶解，4℃下加入2.5%戊二醛溶液，半抗原:戊二醛的摩尔比为1:1.5，避光混匀搅拌反应1h，得活化的半抗原溶液；

取牛血清白蛋白，半抗原与牛血清白蛋白的摩尔比为80:1，用0.1M pH9.6碳酸盐缓冲液溶解,其中溶解后的牛血清白蛋白浓度大于3mg/mL，且碳酸盐缓冲液与N,N-二甲基甲酰胺DMF的体积比例为5:1；在0℃下，将活化的半抗原溶液慢速滴加到牛血清白蛋白溶液中，0℃反应1h，室温下反应6h；用PBS缓冲液透析2天，期间更换PBS缓冲液4次，即得到邻苯二甲酸酯类塑化剂通用人工抗原。

2.根据权利要求1所述免疫检测用邻苯二甲酸酯塑化剂通用人工抗原的合成方法，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、匙孔血蓝蛋白KLH、血蓝蛋白LPH、鸡卵清白蛋白OVA、人血清白蛋白HSA之一种。

3.根据权利要求1所述免疫检测用邻苯二甲酸酯塑化剂通用人工抗原的合成方法，其特征在于：邻苯二甲酸酯类塑化剂通用半抗原的分子结构式如式I所示：

式I。

4.用权利要求1所述方法合成的邻苯二甲酸酯塑化剂通用人工抗原的应用，其特征在于制备邻苯二甲酸酯塑化剂通用抗体，所述抗体为多克隆抗体和/或单克隆抗体。

5.用权利要求1所述方法合成的邻苯二甲酸酯塑化剂通用人工抗原的应用，其特征在于在检测邻苯二甲酸酯类塑化剂中的应用，检测食品中的邻苯二甲酸酯类塑化剂残留。