[发明专利]新型阳离子脂质体核酸类药物制剂，及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及阳离子脂质体，更具体地涉及一种含有聚羧基甜菜碱中性脂质的阳离子脂质体，包含其的核酸类药物制剂及它们的制备方法和应用。

背景技术

基因转染是将具有生物功能的核酸转运至细胞内，并使核酸在细胞内维持其生物功能。由于裸露的核酸分子在组织或细胞中易被核酶降解，且核酸分子自身带有负电荷，不利于细胞膜作用，细胞渗透能力差。因此，研究人员积极开发了多种基因载体，并且在其选择性、安全性和高效性上不断进行研究和改进。目前，研究和临床应用中常用的载体大致分为病毒载体和非病毒载体两类。病毒载体因其高效而倍受关注，但其负载量低、特异性不强、安全性差和无法实现大规模生产等缺点，给实际应用带来很大障碍。非病毒载体主要包括阳离子聚合物和阳离子脂质体。阳离子聚合物基因载体相对于病毒载体具有一定优势，然而其基因转染效率低，所用聚合物材料多为非生物可降解材料，尤其是反复给药后这些材料容易积聚于体内，可能会引发毒性反应。阳离子脂质体通常由阳离子脂质和辅助脂在适当的条件下复合而成，其中阳离子脂质通过静电作用与基因复合，而辅助脂则起到防止脂质氧化或将配体连接至脂质体的表面的作用或者可以减少脂质颗粒的聚集。与阳离子聚合物相比，阳离子脂质体具有低毒、生物相容性好及转染效率高等优点，是一种应用较为广泛的非病毒基因载体。

虽然阳离子脂质体是一种具有发展前景的非病毒载体，然而其在体内应用中仍然存在困难。主要是阳离子脂质体基因复合物由于表面带有正电荷，易于与带有负电荷的血清蛋白发生非特异性吸附，形成大尺寸的聚合物，该聚合物易被单核吞噬系统清除，从而导致阳离子脂质体基因复合物在血液中的循环能力变差，转染效率降低。为此，需要对阳离子脂质体进行表面修饰，制备长循环阳离子脂质体。目前常用的长循环阳离子脂质体修饰试剂为基于聚乙二醇（PEG）的脂质分子，如二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇（DSPE-PEG）分子。PEG通过氢键和溶剂中的水分子作用，在被修饰的阳离子脂质体表面形成一层水合层，掩盖阳离子脂质体表面正电荷，从而达到抑制蛋白质吸附并减少吞噬系统识别的作用。然而，应用中发现，基于DSPE-PEG修饰的阳离子脂质体基因转染试剂尽管细胞毒性低、血清稳定性好，操作简单，但仍存在以下缺点：（1）PEG修饰影响阳离子脂质体对于基因的复合能力，导致阳离子脂质体对基因复合能力不好，包埋率降低；（2）PEG修饰影响阳离子脂质体基因转染试剂的内涵体逃逸过程，导致基因无法有效释放进入细胞质，降低基因转染效率。

另一种常用的阳离子脂质体Lipofectamine^TM2000（Invitrogen）具有良好的基因复合能力和内涵体逃逸能力，但是其细胞毒性大（存活率<50%），在血清中稳定性不好，因此转染效率也较低，并且其在转染过程中需要更换培养基，操作也比较复杂。

因此本领域中需要生物毒性小，在血清中稳定，转染效率更高并且操作简单的阳离子脂质体以及相应的核酸类药物制剂。

发明内容

为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明的发明人进行了大量、细致的研究工作，结果发现，聚羧基甜菜碱中性脂质的每个单体单元侧链都有一个阴离子基团（羧酸根基团）和一个阳离子基团（季胺基团）并且总体表现中性，可利用阳离子和阴离子基团与水分子的静电相互作用吸附大量水分子，在被修饰阳离子脂质体表面形成水合层，有效抵抗非特异性蛋白质与阳离子脂质体的吸附作用，增强阳离子脂质体的血液稳定性，延长阳离子脂质体的血液循环时间，提高阳离子脂质体的基因转染和治疗效率，从而完成了本发明。

因此，本发明的目的在于提供一种具有优异抗非特异性蛋白吸附性能的用聚羧基甜菜碱（PCB）中性脂质分子修饰的阳离子脂质体核酸类药物制剂，及其制备方法和应用。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

在第一方面，本发明提供了一种阳离子脂质体，其特征在于，所述阳离子脂质体包含阳离子脂质、辅助脂和聚羧基甜菜碱中性脂质，优选地，还包含冷冻保护剂；