[发明专利]一种从鱼糜漂洗液中提取抗菌鱼蛋白铁肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鱼蛋白铁肽的提取方法，特别是关于一种从鱼糜漂洗液中提取抗菌鱼蛋白铁肽的方法。

背景技术

鱼糜制品在中国的发展前景是十分广阔的。但是在鱼糜生产中，为了得到弹性好、色泽白的优质鱼糜，采肉后的碎鱼肉需用大量的清水进行漂洗。在漂洗过程中一定量的水溶性蛋白质、色素、脂类等物质溶于水中，作为废水而废弃，十分可惜。鱼糜漂洗液中所含的必需氨基酸齐全，各种氨基酸组成合理，易被人体消化吸收利用，是一种优质蛋白质。从鱼糜漂洗水中提取的蛋白，可作为蛋白源添加到食品中供人食用，也可以添加到饲料中，供各种动物养殖用，用途广泛。我国每年远洋捕捞量至少达几万吨,漂洗液达几十万吨,数量相当可观。因此从漂洗液中提取氨基酸和蛋白质，并高效利用提取的氨基酸和蛋白质，具有重要的经济价值和社会意义。

现代生物代谢研究发现，蛋白经消化酶水解后，并不都是被水解成氨基酸形式被吸收，更多则是以短肽或寡肽形式吸收，刘洋等研究鳀鱼水解肽用于促动物生长（鳀鱼蛋白酶水解物的营养评价[J].青岛海洋大学学报,1996,26(1):37-43.）等。水解肽-金属配合物是由可溶性金属离子同多肽按一定摩尔比结合而成的有机元素鳌合物，具有稳定性高、吸收快、适口性好、生物效价高等特点。如邓尚贵等研究低值鱼下脚料水解肽铁(Ⅱ)螯合物具有抗菌作用（低值鱼蛋白多肽-铁(Ⅱ)螯合物的酶解制备及其抗氧化、抗菌活性[J].湛江海洋大学学报，2006，26(4)：54-58.）、Worst等（WorstDJ,OttoBR,De Graff J.Iron-repressible outer membrane proteins of Helicobacter pylori involved in heme uptake[J].Infect Immun,1995,63:4161-4165.）研究发现多肽-铁螯合物体内吸收率为无机铁络合物的49倍。α-酪蛋白特定多肽经磷酸化后，形成的酪磷肽可螯合Cu、Ca及Zn等元素，具有防治骨质疏松、调节血压等功效。此外，研究发现部分蛋白肽-Fe配合物能自由地通过成熟的胎盘而到达特定的靶点器官（Maria KK.Iron speciation in intestinal contents of rats fed meal composed of meat and nonmeat sources of protein and fat[J].Food Chem,1995,52:47-56.）。这些研究结果说明水解肽-金属配合物是一种安全的，可食用的物质。

因此，有效利用鱼糜漂洗液中的可溶性蛋白制备有抗菌抗氧化功效的功能性食品或食品配料，可为实现鱼资源的综合利用、提高其附加值开辟新的途径。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种从鱼糜漂洗液中提取抗菌鱼蛋白铁肽的方法，具有操作简单、分离提取率高、成本低的特点，制得的抗菌鱼蛋白铁肽具有天然、无毒、无污染、高效抗菌等优点。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种从鱼糜漂洗液中提取抗菌鱼蛋白铁肽的方法，其特征在于步骤依次为：

1）将鱼糜漂洗液过滤，用盐酸调节滤液pH值为5.0～6.0，静置90～120min，用NaOH调节pH值为8.0～9.0，加入碱性蛋白酶，酶解8～10h后灭酶，离心，去除沉淀，得到酶解液；

2）按抗坏血酸与酶解液1～60mg：80mL，氯化亚铁与酶解液1～30mg：40ml的比例加入抗坏血酸和氯化亚铁，充分搅拌后调节pH至6.0～8.0，抽真空震荡螯合30～60min，离心去沉淀后真空浓缩，冷冻干燥，即为抗菌鱼蛋白铁肽粗提物；

3）对上述所得到的抗菌鱼蛋白铁肽粗提物进行一下纯化，得到成品抗菌鱼蛋白铁肽。

作为优选，所述鱼糜漂洗液的滤液与碱性蛋白酶的重量份数比为100：4～7；所述碱性蛋白酶酶解温度为30～50℃，所述灭酶的温度为90～100℃，灭酶时间为10～20min。

作为优选，所述步骤2）的螯合温度为30～50℃，所述真空浓缩的温度为40～60℃，浓缩时间为10～12h；所述冷冻干燥的温度为-60～-70℃，冷冻时间为24～48h。

作为改进，所述步骤3）的纯化的具体步骤为：将所述抗菌鱼蛋白铁肽粗提物经葡聚糖凝胶层析洗脱分离，有抗菌活性的层析组分再经反向高效液相色谱洗脱，收集洗脱液；接着对所述洗脱液进行真空冷冻干燥，即为抗菌鱼蛋白铁肽。