[发明专利]一种从鱼糜漂洗液中提取抗菌鱼蛋白铁肽的方法

权利要求书

1.一种从鱼糜漂洗液中提取抗菌鱼蛋白铁肽的方法，其特征在于步骤依次为：

1）将鱼糜漂洗液过滤，用盐酸调节滤液pH值为5.0～6.0，静置90～120min，用NaOH调节pH值为8.0～9.0，加入碱性蛋白酶，酶解8～10h后灭酶，离心，去除沉淀，得到酶解液；

2）按抗坏血酸与酶解液1～60mg：80mL，氯化亚铁与酶解液1～30mg：40ml的比例加入抗坏血酸和氯化亚铁，充分搅拌后调节pH至6.0～8.0，抽真空震荡螯合30～60min，离心去沉淀后真空浓缩，冷冻干燥，即为抗菌鱼蛋白铁肽粗提物；

3）对上述所得到的抗菌鱼蛋白铁肽粗提物进行一下纯化，得到成品抗菌鱼蛋白铁肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述鱼糜漂洗液的滤液与碱性蛋白酶的重量份数比为100：4～7；所述碱性蛋白酶酶解温度为30～50℃，所述灭酶的温度为90～100℃，灭酶时间为10～20min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤2）的螯合温度为30～50℃，所述真空浓缩的温度为40～60℃，浓缩时间为10～12h；所述冷冻干燥的温度为-60～-70℃，冷冻时间为24～48h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤3）的纯化的具体步骤为：将所述抗菌鱼蛋白铁肽粗提物经葡聚糖凝胶层析洗脱分离，有抗菌活性的层析组分再经反向高效液相色谱洗脱，收集洗脱液；接着对所述洗脱液进行真空冷冻干燥，即为抗菌鱼蛋白铁肽。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述葡聚糖凝胶层析柱为Sephadex G50，所述洗脱液为pH6.5～7.0，0.09～0.11mol/L的磷酸缓冲液，洗脱速度为16～20mL/h；所述反向高效液相色谱为XBrige^TMPrep-C18；所述真空冷冻干燥温度为-60～-70℃，冷冻时间为24～36h。