[发明专利]一种性能改进的重组金黄色葡萄球菌蛋白A亲和配基及其构建方法

权利要求书

1.一种性能改进的重组金黄色葡萄球菌蛋白A，其特征在于重组蛋白A分子结构由1到10个Z片段串联组成。

2.根据权利要求1所述的一种性能改造的重组金黄色葡萄球菌蛋白A，其特征在于编码Z片段的基因具有序列表SEQ ID.3所述的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的一种性能改造的重组金黄色葡萄球菌蛋白A，其特征在于Z片段的氨基酸残基具有序列表SEQ ID No.8所述的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所属的一种性能改造的重组蛋白A，其特征在于Z序列是由B序列改造得到的，是在B片段的Loop2后面添加6个甘氨酸，并将第23、30位的天冬酰胺和苯丙氨酸分别替换成苏氨酸和丙氨酸，在Z序列的C端添加有2个半胱氨酸。

5.根据权利要求1所述的一种性能改造的重组蛋白A，其特征在于1到10个Z片段串联后具有序列表SEQ ID No.8-17所述的氨基酸序列。

6.一种如权利要求1所述的性能改造的重组蛋白A的构建方法，其特征在于克隆并改造Z基因序列的3对引物F₀和R₀、F₁和R₁、F₂和R₂，其核苷酸序列分别为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6和SEQ ID No.7，利用重叠PCR得到Z序列，使用一组同尾酶和限制性内切酶BamH I将1到10个Z序列进行串联得到Z_n序列，利用一组限制性内切酶将Z_n连接到质粒pET-28a，转化感受态E.coli BL21(DE3)得到产不同个数Z序列串联的重组蛋白A菌株，通过一定终浓度的IPTG诱导获得由1-10个Z片段组成的重组金黄色葡萄球菌蛋白A。

7.根据权利要求6所述的一组同尾酶，其特征在于是Nhe I和Xba I。

8.根据权利要求6所述的一组限制性内切酶，其特征在于是Noc I和BamH I。