[发明专利]能够抑制白色念珠菌生长的唾液乳酸杆菌及其分离方法

权利要求书

1.一种能够抑制白色念珠菌生长的唾液乳酸杆菌Lactobacillus salivarius LI01，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.7045。

2.根据权利要求1所述的一种能够抑制白色念珠菌生长的唾液乳酸杆菌，其特征在于所述的唾液乳酸杆菌形态学特征为：菌体杆状，不产孢子，无运动性，革兰氏染色呈阳性，在MRS琼脂培养基上形成乳白色群落。

3.根据权利要求1所述的一种能够抑制白色念珠菌生长的唾液乳酸杆菌，其特征在于所述唾液乳酸杆菌的16S核糖体DNA全序列如SEQ ID NO：1所示。

4.根据权利要求1所述的一种能够抑制白色念珠菌生长的唾液乳酸杆菌，其特征在于所述的唾液乳酸杆菌的全细胞水解脂肪酸组成为： 

。

5.一种根据权利要求1所述的一种能够抑制白色念珠菌生长的唾液乳酸杆菌的分离方法，其特征在于包括如下步骤：

1）分别取少量来自不同健康人不同部位含微生物样本，加入到0.5～10毫升富集培养基中，20～37⁰C、厌氧条件下，富集培养24～72小时；

2）将上述样本富集培养基，稀释100～10000倍后，取50～300微升涂布到筛选平板上，20～37⁰C厌氧培养24～72小时；

3）取对数生长期的白色念珠菌，加入到灭菌后冷却到40～60⁰C的半固体培养基，混合均匀，最终浓度10⁷～10⁸个/毫升；

4）将3-10毫升上述40～60⁰C新鲜配置的含有白色念珠菌的半固体培养基，铺到筛选平板上，37⁰C好氧培养12～48小时，观察抑菌圈；

5）从筛选平板中，菌斑上方有白色念珠菌抑菌圈的菌斑中挑取菌落，在复筛液体培养基中培养12～36小时，离心、过滤去除微生物，接入1%～5%的对数生长期的白色念珠菌，比较并选取能较好抑制白色念珠菌生长的菌株。

6.根据权利要求5所述的一种能够抑制白色念珠菌生长的唾液乳酸杆菌的分离方法，其特征在于所述的富集培养基的成份为：蛋白胨5～10克,牛肉膏 5～10克,酵母提取物2～5克,葡萄糖5～10克,乳果糖2～5克，吐温80 0.5～1克,磷酸氢二钾1～2克,三水乙酸钠2～5克,柠檬酸二铵1～2克,七水硫酸镁0.2～0.5克, 四水硫酸锰 0.03～0.07克，pH6.0～7.0，蒸馏水 900～100毫升。

7.根据权利要求5所述的一种能够抑制白色念珠菌生长的唾液乳酸杆菌的分离方法，其特征在于所述的筛选平板培养基的成份为：酵母提取物3～8克，胰蛋白胨8～12，葡萄糖5～15克，磷酸二氢钾4～8克，硫酸亚铁0.02～0.05克，七水硫酸镁0.4～0.8克，三水乙酸钠20～30克，柠檬酸二铵1～3克，四水硫酸锰0.1～0.2克，琼脂 15～25克，吐温80 0.5～1克，pH值5.0～6.0。

8. 根据权利要求5所述的一种能够抑制白色念珠菌生长的唾液乳酸杆菌的分离方法，其特征在于所述的半固体培养基的成份为：琼脂粉3～10克，蛋白胨5～10克,酵母提取物3～5克,葡萄糖15～20克,吐温80 0.5～1克,磷酸氢二钾1～2克,醋酸钠2～5克, pH5.5～6.5，蒸馏水 900～100毫升。

9.根据权利要求5所述的一种能够抑制白色念珠菌生长的唾液乳酸杆菌的分离方法，其特征在于所述的复筛液体培养基的成份为：蛋白胨5～10克,牛肉膏 5～10克,酵母提取物3～5克,葡萄糖15～20克,吐温80 0.5～1克,磷酸氢二钾1～2克,醋酸钠2～5克,柠檬酸二铵1～2克,七水硫酸镁0.2～0.5克, 四水硫酸锰 0.03～0.07克，pH6.0～7.0，蒸馏水 900～100毫升。