[发明专利]一种黑曲霉α-葡萄糖苷酶基因及其高效表达方法有效
| 申请号： | 201310095971.4 | 申请日： | 2013-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN103146726A | 公开（公告）日： | 2013-06-12 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;刘旭;吴丹;陈坚 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/56 | 分类号： | C12N15/56;C12N15/81;C12N9/30;C12R1/685;C12R1/84 |
| 代理公司： | 北京汇信合知识产权代理有限公司 11335 | 代理人： | 陈圣清 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 曲霉 葡萄 糖苷酶 基因 及其 高效 表达 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种黑曲霉α-葡萄糖苷酶基因，其特征在于其基因核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.一种表达权利要求1所述基因的方法，其特征在于，将二硫键异构酶基因与权利要求1所述α-葡萄糖苷酶基因agluOP在毕赤酵母中共表达。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，步骤如下：
1）将agluOP基因和质粒pPIC9K同时用Not I酶切连接得到pPIC9K-agluOP；
2）重组质粒经过Bgl II酶切线形化后转化进P.pastoris；
3）pPICZA-pdi经Sac I单酶切线性化后电转至P.pastoris/pPIC9K-agluOP中，挑选转化子。
4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，将感受态细胞涂布于含0.5mg/mL G418抗性浓度的MD平板，然后挑取单菌落点种于含梯度Zeocin抗性的YPD平板。
5.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述毕赤酵母为P.pastorisKM71。
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