[发明专利]检测β-兴奋剂类的一步法酶联免疫检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种检测β-兴奋剂类的一步法酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：β-兴奋剂特异性抗体、包被有β-兴奋剂特异性抗体的酶标板、β-兴奋剂辣根过氧化物酶标记物、克伦特罗标准品、酶标物稀释液、显色剂、清洗液、终止液和浓缩样品稀释液。

2.根据权利要求1所述一种检测β-兴奋剂类的一步法酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述显色剂为过氧化氢或过氧化脲，邻苯二胺或四甲基联苯胺与稳定剂K按体积比5∶5∶1混合而成的溶液。

3.根据权利要求1所述一种检测β-兴奋剂类的一步法酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的酶标物稀释液为含酶稳定剂AH和酶保护剂KEN的磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求1所述一种检测β-兴奋剂类的一步法酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的终止液为2mol/L的盐酸溶液。

5.根据权利要求1所述一种检测β-兴奋剂类的一步法酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的浓缩样品稀释液为含1％BSA的5倍浓缩磷酸盐缓冲液。

6.根据权利要求1所述一种检测β-兴奋剂类的一步法酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述β-兴奋剂特异性抗体是以特异免疫原免疫动物制得，所述特异免疫原是将克伦特罗、沙丁胺醇、特布他林、马布特罗、溴布特罗、妥布特罗和西布特罗通过戊二醛法交联到载体蛋白上制成。

7.根据权利要求6所述一种检测β-兴奋剂类的一步法酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述载体蛋白为多聚赖氨酸、牛血清白蛋白、鸡丙种球蛋白人血丙种球蛋白、或卵清蛋白。

8.根据权利要求6所述一种检测β-兴奋剂类的一步法酶联免疫检测试剂盒，其特征在于，所述动物为兔、鼠或羊。

9.一种检测β-兴奋剂类的一步法酶联免疫检测方法，其特征在于，按照如下步骤进行：

(1)将试剂于盒外充分恢复至室温，恢复时间为1-5小时；

(2)预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，进行双孔检测；

(3)从包被有β-兴奋剂特异性抗体的酶标板上取下所需数量的微孔，将

多余的微孔重新密封并放回2～8℃保存；

(4)将酶标物、浓缩样品稀释液、清洗液根据稀释倍数用蒸馏水配制成工作液；

(5)在B0孔中加入50μL0.0ng/mL标准品溶液，在各标准孔中加入50μL的标准品溶液，在各样品孔中加入50μL样品溶液；

(6)在所有孔中加入100μL的酶标物，晃动反应1-10s，室温下孵育30min；

(7)倒掉微孔中的液体，在所有微孔中加满清洗液，用微量移液器在每个微孔中加入100μL显色剂，晃动酶标板使之混匀；

(8)室温下显色10min，每孔中加入100μL终止液，混匀；

(9)在450nm下检测吸光度，分析计算检测结果。