[发明专利]大豆花叶病毒的一步法环介导逆转录等温扩增检测方法

权利要求书

1.一种用于大豆花叶病毒检测的一步法环介导逆转录等温扩增检测的引物组，其特征在于正向外引物F3的序列为SEQ ID NO.1，反向外引物B3的序列为：SEQ ID NO.2，正向内引物FIP的序列为：SEQ ID NO.3，反向内引物BIP的序列为：SEQ ID NO.4。

2.权利要求1所述的引物组在制备一步法环介导逆转录等温扩增检测大豆花叶病毒的试剂盒中的应用。

3.一种用于大豆花叶病毒检测的一步法环介导逆转录等温扩增检测的试剂盒，其特征在于包含权利要求1所述的引物组。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒包含以下RT-LAMP反应液：

5.大豆花叶病毒的一步法环介导逆转录等温扩增检测方法，其特征在于使用权利要求1所述的引物组进行RT-LAMP反应，反应呈阳性的，表明存在大豆花叶病毒，反应呈阴性的表示待测样品不含大豆花叶病毒。

6.根据权利要求5所述的大豆花叶病毒的一步法环介导逆转录等温扩增检测方法，其特征在于具体包含如下步骤：

（1）对待检样品进行RNA粗提取得RNA粗提取液；

（2）以提取的RNA为模板，以所述的特异性引物F3、B3、FIP及BIP为引物配制RT-LAMP反应溶液；

（3）将配好的RT-LAMP反应溶液于65°C的反应温度中进行反应，反应时间为60min，然后80℃，5min；

（4）对反应产物进行结果分析：将反应产物于1%TBE琼脂凝胶中电泳或用荧光染料SYBRGreen I对扩增产物的可视化，反应呈阳性，表明存在大豆花叶病毒；反应呈阴性的表示待测样品不含大豆花叶病毒。

7.根据权利要求6所述的大豆花叶病毒的一步法环介导逆转录等温扩增检测方法，其特征在于所述的RNA粗提取液的提取方法为：以1mg:4μL的比例，取叶片于0.5M的NaOH中进行研磨，例如取100mg叶片，用400μL的0.5M NaOH中快速研磨后，低速离心后快速取10μL上清于490μL的100mM pH8.0Tris–HCl溶液中，混匀待用。

8.根据权利要求6所述的大豆花叶病毒的一步法环介导逆转录等温扩增检测方法，其特征在于所述的RT-LAMP反应溶液组成为：