[发明专利]一种西洋参不定根组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种西洋参组织培养方法，属于中药西洋参组织培养领域。

背景技术

西洋参(Panax quinquefolium L．)，又称美国人参(American ginseng)，原产于美国东部和加拿大，是五加科(Araliaceae)人参属植物，以根入药最为常见。现代药理学研究表明，西洋参具有调节糖代谢、增强免疫力、延缓衰老、抗肿瘤、降血压、预防及治疗心血管疾病、保肝护肝、增强学习能力和记忆能力、益智等作用。由于多年来的过度采挖，西洋参赖以生存的森林生态环境遭到严重破坏，野生西洋参资源枯竭，目前用于药用的多为栽培西洋参。然而西洋参的栽培生产周期长，占地面积大，且其品质易受气候、栽培条件及病虫害的影响，供应难以满足市场的需求；农残超标、老参地等问题也极大地限制了人工栽培西洋参的发展。西洋参组织培养方法具有不受生长季节限制、不携带病毒、培养周期短等优点，且易于进行工业化大规模生产，因此具有很大的发展前途。目前我国关于西洋参组织培养的报道很多，但主要集中于愈伤组织以及悬浮细胞的培养。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种西洋参不定根组织培养方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种西洋参不定根组织培养方法，包括如下步骤：

（1）西洋参愈伤组织的诱导：

取灭菌后的西洋参新鲜根除去根皮的组织，切成0.5～1cm²的小块接种到第一种固体培养基上，在无菌、23～25℃及避光条件下培养3～4周，形成愈伤组织；

（2）西洋参愈伤组织的继代培养：

将愈伤组织接种到第二种固体培养基上，在无菌、23～25℃及避光条件下培养3～4周；

（3）西洋参不定根的诱导：

将步骤（2）获得的继代培养出的愈伤组织接种到第三种固体培养基上，在无菌、23～25℃及避光条件下培养3～5周，培养出西洋参不定根；

（4）西洋参不定根的继代培养：

挑选出生长良好的步骤（3）获得的西洋参不定根接种到液体培养基内，在摇床上，在无菌、23-25℃及避光条件下培养4～5周，获得西洋参不定根；

（5）西洋参不定根的反应器培养：

将步骤（4）获得的西洋参不定根接种到含有2L液体培养基的3L球形鼓泡式反应器中，在无菌、20-25℃及避光条件下培养4～5周，收获，干燥；

所述第一种固体培养基为：含有1.0-2.0mg/L(2,4-二氯苯氧基)乙酸(2,4-D)、0.1-0.5mg/L激动素(KT)、30-40g/L蔗糖的pH=5.8-6.0的MS固体培养基；

所述第二种固体培养基为：含有1.0-2.0mg/L(2,4-二氯苯氧基)乙酸(2,4-D)、0.1-0.5mg/L6-苄基腺嘌呤(6-BA)、30-40g/L蔗糖的pH=5.8-6.0的MS固体培养基；

所述第三种固体培养基为：含有1.0-5.0mg/L吲哚丁酸(IBA)、30-40g/L蔗糖的pH=5.8-6.0的MS固体培养基；

所述液体培养基为含有3.0-5.0mg/L吲哚丁酸(IBA)、0.5-1.0mg/L萘乙酸(NAA)、30-40g/L蔗糖的pH=5.8-6.0的MS液体培养基。

本发明的优点：

本发明利用组织培养方法培养西洋参不定根，比培养西洋参细胞更具有实际意义，其生长速率要比原根快很多，（反应器培养时一个培养周期后可增殖21.76倍）并且其活性次生代谢产物的产率高且比较稳定，培养物均一，同时又不受天灾等自然环境的影响。本发明具有工艺过程简单，成本低廉,诱导率高，重复性好，不定根增殖快等特点。提供一种西洋参不定根组织培养及的产品开发的方法。

附图说明

图1为不同激素及配比对不定根诱导的影响。

图2为西洋参不定根液体培养体系的建立；图中：A.西洋参愈伤组织B.不定根的诱导C.不定根接种于液态培养基D.西洋参不定根培养体系。

图3为不同激素对不定根生长的影响。

图4为西洋参不定根反应器培养及收获的不定根；图中：A西洋参不定根反应器培养；B西洋参不定根反应器培养收获的不定根。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

一种西洋参不定根组织培养方法，包括如下步骤：

（1）西洋参愈伤组织的诱导：