[发明专利]一种丝氨酸蛋白酶编码基因和重组酶及应用

权利要求书

1.一种重组丝氨酸蛋白酶编码基因，其特征在于：所述酶基因序列为SEQ ID NO.1。

2.根据权利要求1所述的一种丝氨酸蛋白酶编码基因，其特征在于：所述重组丝氨酸蛋白酶基因编码的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

3.一种权利要求1或2所述的一种重组丝氨酸蛋白酶的制备方法，其特征在于：

（1）重组丝氨酸蛋白酶菌株DS/BL21(DE3)的构建：

使用引物FDS：GAGCATATGTTTCTTAAACTCTTGCGT，RDS：ATCTCGAGCTACTGACTGCTGTCC；以PCR方法从菌株Pantoea ananatis P5（CGMCC NO.5356）基因组中克隆获得丝氨酸蛋白酶编码基因全长，将该基因通过限制性内酶NdeI和XhoI酶切后，连接到原核表达载体pET258中，构建重组质粒pETDS，转化大肠埃希氏菌E.coli BL21(DE3)细胞，筛选获得高效表达重组丝氨酸蛋白酶的菌株，即重组大肠埃希氏菌DS/BL21(DE3)；

（2）重组菌株DS/BL21(DE3)的发酵培养与诱导表达：

将重组菌株DS/BL21(DE3)按1%接种量转接到50mL LB（含30μg/mL卡那霉素）液体培养基中于37℃震荡培养；待OD₆₀₀为0.5时，加入0.1mM异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导4h终止发酵；将发酵液在液氮速冻，放冰水中缓慢融化完全，使用超声波破碎细胞，10000r/min离心5min，取上清即为酶液。

4.重组丝氨酸蛋白酶的应用，所述丝氨酸蛋白酶能够应用于生产丝氨酸蛋白酶，应用于蛋白质降解的科研与生产。