[发明专利]一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法

权利要求书

1.一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于上述方法包括以下步骤： 

一、白桦树皮提取液的制备：将白桦树皮在超低温条件下，以26～30Hz频率研磨1～3min，研磨后得到的粉末在80℃烘箱中烘干，向烘干得到的白桦树皮粉末中加入无水乙醇，超声提取55～65min，取上清液用有机滤膜过滤，即得到白桦树皮提取液，其中所述的烘干后的白桦树皮粉末和无水乙醇的质量与体积比为（0.5～2.0）g：100mL； 

二、将白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的标准品分别用无水乙醇配制成7种标准工作液； 

三、将标准工作液与步骤一中得到的白桦树皮提取液依次注入高效液相色谱仪，以体积百分含量0.1％磷酸水溶液为水相，乙腈为有机相进行梯度洗脱； 

其中，高效液相色谱条件为： 

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的C₁₈色谱柱，规格为4.6mm×250mm×5μm，柱温为30℃，流动相中有机相为乙腈，水相为体积百分含量为0.1％磷酸水溶液，流速0.5～1.2mL/min，检测波长195nm，进样量10μL； 

四、以标准工作液目标峰峰面积和相应物质浓度建立标准曲线，根据相应峰的保留时间和光谱图确定目标峰，采用外标法定量计算白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸含量，即完成检测。 

2.根据权利要求1中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的超低温为在液氮条件下研磨白桦树皮。 

3.根据权利要求2中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的以28Hz频率研磨2min。 

4.根据权利要求3中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的采用超声波提取，是以无水乙醇为提取液，在超声波频率40kHz，功率100W，水温48～52℃环境中，提取55～65min。 

5.根据权利要求4中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的采用超声波提取，是以无水乙醇为提取液，在超声波频率40kHz，功率100W，水温50℃环境中，提取60min。 

6.根据权利要求5中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的用有机滤膜过滤是采用0.45μm孔径的有机滤膜。 

7.根据权利要求6中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤一中所述的烘干后的白桦树皮粉末和无水乙醇的质量与体积比为1g：100mL。

8.根据权利要求7所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法， 其特征在于步骤二中所述的7种标准工作液白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的浓度分别为：a、2.5μg/mL、25μg/mL和10μg/mL；b、5μg/mL、50μg/mL和20μg/mL；c、10μg/mL、100μg/mL和40μg/mL；d、20μg/mL、200μg/mL和80μg/mL；e、50μg/mL、500μg/mL和200μg/mL；f、100μg/mL、1000μg/mL和400μg/mL；g、150μg/mL、1500μg/mL和600μg/mL。 

9.根据权利要求8中所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤三中所述的梯度洗脱过程中有机相的浓度变化为线性结合“J”型和反“J”型曲线。 

10.根据权利要求9所述的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法，其特征在于步骤三中的流动相中乙腈的体积百分含量依次为55%～80%、80%～90%,、90%～100%、100%～55%。