[发明专利]一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法。

背景技术

三萜类（triterpenoids）化合物是一类基本母核由30个碳原子组成的，在生源关系上由鲨烯（squalene）衍生而来的萜类化合物，在植物中分布广泛，具有广泛的药理活性，具有溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降低胆固醇、杀软体动物、抗生育等活性。白桦脂醇、白桦脂酸和齐墩果酸均是重要的三萜化合物。

白桦脂醇（Betulin），又名桦木脑，属于羽扇豆烷型的五环三萜类化合物，分子式为C₃₀H₅₀O₂，相对分子质量442.72，白色针晶，熔点256～257℃，溶于乙醇、氯仿和苯，微溶于冷水、石油醚等，存在于多种植物中，尤其在白桦树皮中的含量较高。白桦脂醇具有重要的药理作用，实验表明，白桦脂醇及其衍生物作为生物抑制剂在HIV和癌症治疗方面表现出了巨大的潜能。同时，白桦脂醇具有消炎、抗病毒、抗氧化、抑制头发纤维中蛋白质溶解、改善受损头发光泽、促进头发生长等活性，可应用于食品、化妆品及医药等行业。此外，白桦脂醇作为白桦脂酸的前体，可以用来人工合成其衍生物。

白桦脂醇

白桦脂酸（Betulinicacid），又名桦木酸，是白桦脂醇的重要衍生物，也属于羽扇豆烷型五环三萜化合物，分子式为C₃₀H₄₈O₃，相对分子质量456.71，熔点为295～298℃，为最具开发前景的三萜类化合物之一。白桦脂酸具有极强的抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗菌、抗疟和抗蠕虫活性，且对心脑血管系统亦有一定作用。

白桦脂酸

齐墩果酸（Oleanicacid），又名土当归酸，属齐墩果烷型五环三萜化合物，分子式为C₃₀H₄₈O₃，相对分子质量456.71，熔点300℃。具有护肝降酶、促进肝细胞再生、抗炎、强心、利尿、抗肿瘤等作用，还具有降血糖、降血脂、镇静的作用，是开发治疗肝病和降血糖等药物有效成分。

齐墩果酸

天然的三萜不溶或难溶于水，易溶于低极性的有机溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、乙醚等，传统提取分离方法，一般根据其溶解性差异采用不同的有机溶剂进行提取分离。比如采用极性较小的溶剂如氯仿、乙醚等提取。近来，一些新型的提取技术逐渐兴起，如超临界流体萃取法、超声循环提取法、半仿生提取法、微波萃取法等在三萜类化合物提取上显示出了巨大优势。色谱分离方法和波谱结构测定技术的迅速发展，使得对三萜这种结构复杂的化合物的定性定量分析成为可能。由于三萜化合物汽化困难，故实际使用中，人们更多选用高效液相色谱进行一般定性定量测定。在现有可查范围内，利用HPLC同时测定白桦树皮中白桦脂醇、白桦脂酸和齐墩果酸未见报道。目前，对三萜的测定多采用等度洗脱（张泽等.高效液相色谱法测定白桦树皮中白桦酯醇的含量，林产化学与工业，2004年1月，61-63页；范桂枝等.白桦不同部位及种源间白桦酯醇含量的差异分析，林产化学与工业，2007年4月，103-106页；潘萍等.Rp—Hplc测定大叶紫珠中桦木酸的含量，中国中药杂志，2008年，33卷第7期，753-755页），这些方法的缺点是：不能完全分离白桦脂醇、白桦脂酸和齐墩果酸三种物质，且对于目标峰进行峰纯度分析显示峰中含有较多杂质，严重干扰了测定结果的准确性。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术不能完全分离三种物质、检测结果不准确的问题，提供一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法。

本发明的一种白桦树皮中白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的检测方法包括如下步骤：

一、白桦树皮提取液的制备：将白桦树皮在超低温条件下以26～30Hz频率研磨1～3min，研磨后得到的粉末在80℃烘箱中烘干，向烘干得到的白桦树皮粉末中加入无水乙醇，超声波辅助提取55～65min，取上清液用有机滤膜过滤，即得到白桦树皮提取液，其中所述的烘干后的白桦树皮粉末和无水乙醇的质量与体积比为（0.5～2.0）g：100mL；

二、将白桦脂酸、白桦脂醇和齐墩果酸的标准品分别用无水乙醇配制成7种标准工作液；

三、将标准工作液与步骤一中得到的待测样品溶液依次注入高效液相色谱仪，以体积百分含量为0.1％磷酸水溶液为水相，乙腈为有机相进行梯度洗脱；

其中，高效液相色谱条件为：