[发明专利]鮸鱼抗氧化蛋白Prx6基因的荧光定量PCR检测方法

权利要求书

1.用于检测鮸鱼抗氧化蛋白Prx6基因的荧光定量PCR引物对，其特征在于，其包括：

正向引物Prx6-RT-F：5’-GTATCCTGTTCTCCCACCC-3’和

反向引物Prx6-RT-R：5’-CAAGGCAATCATCTTCACG-3’。

2.含有权利要求1所述引物对的用于检测鮸鱼抗氧化蛋白Prx6基因的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反应缓冲液中的一种或多种。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。

5.鮸鱼抗氧化蛋白Prx6基因的荧光定量PCR检测方法，其是利用权利要求1所述引物对或权利要求2-4任一项所述试剂盒对鮸鱼抗氧化蛋白Prx6基因进行荧光定量PCR检测。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取样品组织中的总RNA，反转录成cDNA；

2）以步骤1）中的cDNA为模板，Prx6-RT-F和Prx6-RT-R为引物，进行荧光定量PCR扩增反应；

3）分析PCR产物。

7.根据权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，荧光定量PCR反应体系以20μl计为：

8.根据权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，荧光定量PCR反应条件为：在ABI 7300实时荧光定量PCR系统上进行反应，荧光定量反应程序模板设置为ddCt Plate，反应循环参数设置为：95℃20s；95℃ 5s，60℃ 30s，共40个循环，利用2^-△△CT法计算相对表达量。

9.根据权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，在进行荧光定量PCR检测之前，还包括特异性PCR检测的步骤，具体为：

1）提取样品组织中的总RNA，反转录成cDNA；

2）以步骤1）中的cDNA为模板，Prx6-RT-F和Prx6-RT-R为引物，进行PCR扩增反应；

3）分析PCR产物。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，PCR反应体系以25μl计为：

PCR反应条件为：94℃ 5分钟；94℃ 30秒，60℃ 30秒，72℃ 1分钟，共30个循环；72℃ 5分钟。