[发明专利]流苏花总黄酮类化合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种流苏花总黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）乙醇溶液提取：

将流苏花药材干燥、粉碎，加入质量浓度为60-80％乙醇浸泡后，加热回流提取3-5小时，过滤得到滤液和残渣，再将残渣以质量浓度为60~80％乙醇加热回流提取2次，每次3-5小时，合并滤液，将滤液减压蒸发浓缩得浸膏；

（2）大孔吸附树脂柱色谱分离：

将得到的浸膏用质量浓度为10-30%乙醇溶解，过滤，将滤液用大孔吸附树脂进行充分吸附，装柱，依次用体积浓度为10%、20%、30%、40%、50%、60%、80%和95%的乙醇-水体系洗脱液进行梯度洗脱，收集乙醇体积浓度为50-60%乙醇-水洗脱馏分，减压浓缩至浸膏状物，将浸膏在50-60℃下真空减压干燥，即得流苏花总黄酮类化合物粗品；

 （3）硅胶柱色谱分离：

将流苏花总黄酮类化合物粗品采用硅胶柱色谱上样分离，依次以CHCl₃：CH₃OH体积比为1: 9，1: 7，1: 5，1: 3为流动相梯度洗脱，采用芦丁作为对照，用紫外光谱测定流苏花总黄酮类化合物的含量，收集含有流苏花总黄酮类化合物大于60%的馏分段；

（4）凝胶柱色谱分离：

将硅胶柱色谱分离后的样品采用凝胶柱色谱分离，采用CHCl₃：CH₃OH体积比为2: 1等度洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥；

（5）半制备高效液相色谱纯化：

将凝胶柱色谱分离后的样品采用半制备高效液相色谱纯化，收集洗出液，减压浓缩，干燥得流苏花总黄酮类化合物，色谱条件为色谱柱ODS-A，20×250mm，流动相为CH₃OH：H₂O，体积比为7:3；

（6）高效液相色谱检测：

最后将纯化后的样品采用高效液相色谱检测，色谱条件为：

色谱仪：Agilent1100高效液相色谱仪，

色谱柱：Agilent Zorbax SB C₁₈色谱柱，4.6×250 mm，5 μm，

流动相：甲醇-乙腈-0.4%冰醋酸，体积比为30: 10: 60，

流速：1.0 mL/min，

柱温：25℃，

检测波长：350 nm。

2.如权利要求1所述的一种流苏花总黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中乙醇浸泡的时间为8-12小时。

3.如权利要求1所述的一种流苏花总黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中第1次加热回流时，乙醇的添加量为流苏花药材质量的10-12倍，第2次和第3次加热回流时，乙醇的添加量是流苏花药材质量的8-10倍。

4.如权利要求1所述的一种流苏花总黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的大孔吸附树脂为D101或AB-8型大孔吸附树脂。

5.由权利要求1所述方法制备的流苏花总黄酮类化合物，其特征在于：由槲皮素-3-甲氧基-7-O-α-L-阿拉伯(1-6)-β-D-葡萄糖苷、北美圣草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、杨梅素-3-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷5种黄酮化合物组成，质量百分含量分别为5-8%、8-12%、3-6%、30-50%和20-30%。

6.一种如权利要求5所述的流苏花总黄酮类化合物的用途，其特征在于：所述的流苏花总黄酮类化合物具有抗氧化活性，具有清除超氧阴离子自由基、DPPH自由基、羟基自由基和抗脂质体过氧化的用途。