[发明专利]一种营养繁殖花卉水仙超低温保存及植株再生方法

权利要求书

1.一种营养繁殖花卉水仙的超低温保存及植株再生的方法，其特征在于，    

所述超低温保存的方法包含步骤有：将营养繁殖花卉的鳞茎进行诱导，切取大小2~5mm的茎尖，将带有根原基和芽原基的茎尖进行预培养，然后置于预处理溶液中在室温下处理15～30min，将在预处理溶液中处理过的茎尖转入玻璃化保护剂中进行冰浴处理60～120min，将冰浴处理的茎尖转移至装有预冷过的新鲜玻璃化保护剂的冷冻管中，然后将冷冻管迅速投入到液氮中保存。

2.根据权利要求1所述的营养繁殖花卉水仙的超低温保存及植株再生的方法，

其特征在于，所述的营养繁殖花卉为崇明水仙。

3.根据权利要求1或2所述的营养繁殖花卉水仙的超低温保存及植株再生的方法,其特征在于，所述诱导包含的步骤有：选取3～4年生崇明水仙鳞茎，然后将水仙鳞茎用70%酒精消毒1 min，0.1%的升汞消毒10~20min，再用无菌水冲洗，冲洗后将鳞茎切块接种于含1 mg·L^-1 BA及1 mg·L^-1 NAA的MS培养基上诱导出小鳞茎。

4.根据权利要求3所述的营养繁殖花卉水仙的超低温保存及植株再生的方法,其特征在于，所述MS培养基上诱导的培养温度为23～27℃, 光照12 h·d^-1，光照强度36 μmol m^-2 s^-1，继代为3个月。

5.根据权利要求1所述的营养繁殖花卉水仙的超低温保存及植株再生的方法,其特征在于，所述预培养是指将诱导后的茎尖接种到含0.3~0.5 mol·L^-1蔗糖的MS培养基内在25℃下培养1~5天。

6.根据权利要求1所述的营养繁殖花卉水仙的超低温保存及植株再生的方法,其特征在于，所述预处理溶液为2 mol·L^-1甘油和0.4 mol·L^-1蔗糖的MS液体培养基。

7.根据权利要求1所述的营养繁殖花卉水仙的超低温保存及植株再生的方法,其特征在于，所述玻璃化保护剂为3.26 mol·L^-1甘油、 2.42 mol·L^-1乙二醇、1.9 mol·L^-1 DMSO和0.4 mol·L^-1蔗糖。

8.一种营养繁殖花卉水仙的超低温保存及植株再生的方法,其特征在于，所述植株再生的方法包括如下步骤：取权利要求1~7所述带有保存后茎尖的冷冻管立即放入40℃水浴中快速解冻2～4 min，将解冻后的茎尖在室温下用含1.2 mol·L^-1蔗糖的MS培养液洗涤2～3次，洗涤时间为每次5～10 min，将洗涤后的茎尖用滤纸吸干，将吸干的茎尖转移至含1 mg·L-1 BA、 0.5 mg·L-1 NAA和 0.5 mg·L-1 GA3的MS半固体培养基中进行暗光或弱光培养5~7 天，然后转入含1 mg·L-1 BA和1 mg·L-1 NAA的MS固体培养基中培养。