[发明专利]人IgE抗体检测试剂盒、制备方法及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测领域，具体地，涉及一种人IgE抗体检测试剂盒、制备方法及检测方法。

背景技术

过敏性疾病又称变态反应性疾病，是指机体对某些抗原初次应答后，再次接受相同抗原刺激时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织损伤为主的特异性免疫应答。1966年，Ishizaka等首先发现并证明IgE抗体是介导I型过敏反应的主要抗体。临床过敏症主要指I型过敏反应，其主要的发生机制为过敏原(allergen)进入机体后可刺激特异性B细胞产生IgE抗体，特异性IgE抗体的Fc段可与肥大细胞和嗜碱性粒细胞膜上的FcεRI对结合，使机体处于致敏状态。当相同的过敏原再次进入致敏状态的机体时，就可与致敏的肥大细胞和嗜碱性粒细胞上的特异性IgE抗体的可变区结合而触发细胞活化，释放组胺、白三烯(LTs)、血小板活化因子(PAF)等生物活性介质。这些生物活性介质可作用于皮肤、血管、呼吸道和消化道等效应器官，引起平滑肌痉挛、毛细血管扩张、血管通透性增加、腺体分泌增加等过敏性症状，临床上常表现为支气管哮喘、过敏性鼻炎、过敏性胃肠炎和过敏性皮肤病等，严重时可引起威胁生命的过敏性休克。

近年来，随着社会经济的发展，IgE介导的过敏性疾病正在迅速增加，影响了很多人的生活质量，给社会带来了沉重的经济负担。根据文献报道，IgE介导的I型过敏反应受累人群已经达到世界人口总数的四分之一。世界卫生组织(WHO)已把过敏性疾病列为21世纪需重点研究和防治的三大疾病之一。过敏性疾病在发达国家已被视为影响健康的主要问题。而且由于过敏性疾病的发生率不断上升，对过敏性疾病的研究和关注较过去大为提高。因此，开展IgE抗体检测新技术的研究适合当前变态反应学临床与研究的需要。

IgE抗体检测方法主要有放射免疫法、荧光免疫法、条带免疫法、免疫印迹法、酶联免疫法（ELISA）等。放射免疫法有放射性污染，容易对人体造成伤害；荧光免疫法需要昂贵的仪器；条带免疫法和免疫印迹法操作复杂，准确性低；这些方法都不适合于在临床上大范围推广。相对而言，酶联免疫法操作简单、准确性高、无需昂贵的仪器，是目前临床上普遍使用的方法。

由于IgE抗体在人体中的含量很低，容易受到IgG等抗体的干扰，常规的ELISA检测方法由于灵敏度不够，检测的准确性较差，尤其是检测低值IgE抗体时，结果更加不准确。而目前进口试剂盒占据国内市场前三名的地位，进口的IgE抗体诊断试剂盒，因价格昂贵，让许多中、小型医院望而却步。中国市场销售仅仅只限于部分大型医院使用，无法进行大幅度普及使用，尤其国内一直长期依赖进口，国外产品在国内市场占有绝对的垄断和控制地位。因此，国内迫切需要开发具有自主知识产权集聚灵敏高、特异性强、重现性好、成本低的国产化IgE抗体检测试剂，这已是当务之急需亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏高、特异性强、重现性好、成本低的人IgE抗体检测试剂盒。

本发明的第二个目的在于提供一种标记效率高的人IgE抗体检测试剂盒的制备方法。

本发明的第三个目的在于提供一种成本低、操作简单、使用方便的人IgE抗体检测方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

人IgE抗体检测试剂盒，包括：包被的微孔板或其制备原料、以及样本稀释液、质控血清、浓缩清洗液、底物液、终止液，还包括生物素标记的抗IgE抗体结合液、辣根过氧化物酶标记的亲和素结合液。

进一步地，所述包被的微孔板为包被有抗人IgE抗体的微孔板。

进一步地，所述样本稀释液为载体蛋白或动物血清溶于磷酸盐缓冲液中；所述质控血清为阳性血清溶于磷酸盐缓冲液中；所述浓缩清洗液为吐温溶于磷酸盐缓冲液中；所述底物液为四甲基联苯胺和过氧化氢溶于柠檬酸缓冲液中；所述终止液为含硫酸的溶液；还包括标准血清，所述标准血清为高值人IgE抗体血清溶于磷酸盐缓冲液中。

进一步地，所述生物素标记的抗IgE抗体结合液为：生物素标记的抗IgE抗体和载体蛋白或动物血清溶于磷酸盐缓冲液中；所述辣根过氧化物酶标记的亲和素结合液为：辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素和载体蛋白或动物血清溶于磷酸盐缓冲液中。

人IgE抗体检测试剂盒的制备方法，包括如下样品的制备：包被的微孔板或其制备原料、样本稀释液、质控血清、浓缩清洗液、底物液、终止液，还包括：

A、生物素标记的抗IgE抗体结合液的制备：