[发明专利]人IgE抗体检测试剂盒、制备方法及检测方法

权利要求书

1.人IgE抗体检测试剂盒，包括：包被的微孔板或其制备原料、以及样本稀释液、质控血清、浓缩清洗液、底物液、终止液，其特征在于：还包括生物素标记的抗IgE抗体结合液、辣根过氧化物酶标记的亲和素结合液。

2.根据权利要求1所述的人IgE抗体检测试剂盒，其特征在于：所述包被的微孔板为包被有抗人IgE抗体的微孔板。

3.根据权利要求2所述的人IgE抗体检测试剂盒，其特征在于：

所述样本稀释液为载体蛋白或动物血清溶于磷酸盐缓冲液中；

所述质控血清为阳性血清溶于磷酸盐缓冲液中；

所述浓缩清洗液为吐温溶于磷酸盐缓冲液中；

所述底物液为四甲基联苯胺和过氧化氢溶于柠檬酸缓冲液中；

所述终止液为含硫酸的溶液；

还包括标准血清，所述标准血清为高值人IgE抗体血清溶于磷酸盐缓冲液中。

4.根据权利要求1、2或3所述的人IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的抗IgE抗体结合液为：生物素标记的抗IgE抗体和载体蛋白或动物血清溶于磷酸盐缓冲液中；所述辣根过氧化物酶标记的亲和素结合液为：辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素和载体蛋白或动物血清溶于磷酸盐缓冲液中。

5.人IgE抗体检测试剂盒的制备方法，包括如下样品的制备：包被的微孔板或其制备原料、样本稀释液、质控血清、浓缩清洗液、底物液、终止液，其特征在于，还包括：

A、生物素标记的抗IgE抗体结合液的制备：

（1）将抗IgE抗体的不变区Fc端进行SATA修饰;

（2）用HPDP-LC-生物素与修饰后的抗IgE抗体进行连接,形成生物素标记的抗IgE抗体；

（3）将生物素标记的抗IgE抗体溶于抗体稀释液中配制生物素标记的抗IgE抗体结合液；

B、辣根过氧化物酶标记的亲和素结合液的制备：

将辣根过氧化物酶与亲和素进行标记，后将辣根过氧化物酶标记的亲和素溶于酶稀释液中配制辣根过氧化物酶标记的亲和素结合液。

6.根据权利要求5所述的人IgE抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于：

所述步骤（1）为：称取抗人IgE抗体融入0.1M的磷酸盐缓冲液中，PH7.0-7.6，使抗体的浓度为1-5mg/ml；称取SATA溶于DMF或DMSO中，使浓度为5-10mg/ml；每毫升抗体溶液中加入10-40μl的SATA溶液，室温反应30-60min；以SephadexG25柱或透析法除去未反应的SATA溶液；

所述步骤（2）为：称取HPDP-LC-生物素溶于DMF或DMSO中，使浓度为1-5mg/ml；每毫升SATA修饰的抗体溶液中加入50-150μl的HPDP-LC-生物素溶液，室温反应60-120min；以SephadexG25柱或透析法除去未反应的HPDP-LC-生物素溶液；

所述步骤（3）为：称取载体蛋白或量取动物血清溶于磷酸盐缓冲液中，并加入保护剂配制抗体稀释液，将生物素标记的抗人IgE抗体溶于抗体稀释液中配制生物素标记的抗IgE抗体结合液；

所述步骤B为：将辣根过氧化物酶与链霉亲和素进行标记，称取载体蛋白或量取动物血清溶于磷酸盐缓冲液中，并加入保护剂配制酶稀释液，将辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素溶于酶稀释液中配制辣根过氧化物酶标记的亲和素结合液。

7.根据权利要求6所述的人IgE抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述步骤B中，辣根过氧化物酶与链霉亲和素3:1以过碘酸钠法进行标记。

8.根据权利要求5、6或7所述的人IgE抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于：所述包被的微孔板为包被有抗人IgE抗体的微孔板。