[发明专利]一种利用Flag蛋白标签沉淀目的蛋白的染色质免疫共沉淀技术

权利要求书

1.此项方法是一种利用Flag蛋白标签沉淀目的蛋白与靶基因的染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP)技术，其主要目的是研究转录因子，此方法的独特之处在于：构建一个目的蛋白基因序列连接有Flag蛋白标签序列的表达载体，将至转染进特定细胞内，利用Flag蛋白标签抗体沉淀目的蛋白与靶基因的DNA-蛋白复合物的染色质免疫共沉淀技术(ChIP)。

2.根据权利要求1所述的技术方法，其特征在于用Flag蛋白标签抗体替代目的蛋白抗体进行染色质免疫共沉淀(ChIP)，它的特点是：a.提高了传统ChIP的特异性；b.减少了抗体的使用。

3.根据权利要求2所述的技术方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)构建目的蛋白基因序列连接有3×Flag蛋白标签序列的真核表达载体(质粒)；

(2)将构建好的表达载体(质粒)转染进特定的细胞系中进行表达；

(3)用Flag蛋白标签抗体沉淀目的蛋白与其靶基因的DNA-蛋白复合物，其后续操作同传统的染色质免疫共沉淀技术(ChIP)。

4.根据权利要求3所述的技术方法，其特征在于步骤(1)构建目的蛋白基因序列连接有3×Flag蛋白标签序列的真核表达载体(质粒)为：

构建一个真核表达载体，其要求：目的蛋白的N端或C端连接有一小段不超过100bp的3×Flag蛋白标签序列，构建成功的载体表达后目的蛋白的N端或C端带有一段很短的Flag蛋白标签，此Flag蛋白标签可以与Flag蛋白标签抗体结合，将目的蛋白沉淀下来。

5.根据权利要求3所述的技术方法，其特征在于步骤(2)将构建好的表达载体(质粒)转染进特定的细胞系中进行表达为：

选定一种要研究的细胞系，将构建好的真核表达载体瞬时转染或稳定转染进细胞内进行表达。

6.根据权利要求3所述的技术方法，其特征在于步骤(3)用Flag蛋白标签抗体沉淀目的蛋白与其靶基因的DNA-蛋白复合物为：

用甲醛将细胞交联，其后再进行超声打碎基因组，再用Flag蛋白标签抗体沉淀目的基因与其靶基因的DNA-蛋白复合物，用特定珠子将复合物拽下，最后解交联回收得到的微量核酸。

7.根据权利要求2所述的技术方法，本方法的特点在于：

a.提高了传统ChIP的特异性：由于Flag蛋白标签抗体与蛋白标签结合的特异性非常好，所以本方法较传统ChIP的特异性高，能够减少非特异的背景，提高可信度；

b.减少了抗体的使用：传统方法需要大量的目的蛋白抗体来提高特异性，此方法能够减少抗体的使用，节省了一定的费用。