[发明专利]一种提高诱导生成多能性干细胞效率的方法有效
| 申请号： | 201310072228.7 | 申请日： | 2011-10-21 |
| 公开（公告）号： | CN103173490A | 公开（公告）日： | 2013-06-26 |
| 发明（设计）人： | 裴端卿;王涛 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 深圳市博锐专利事务所 44275 | 代理人： | 张明 |
| 地址： | 510663 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 诱导 生成 多能 干细胞 效率 方法 | ||
1.一种提高诱导生成多能性干细胞效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：
a、将转录因子与Jhdm1a转入哺乳动物的成体细胞，在诱导培养基中培养，诱导获得多能性干细胞克隆，所述哺乳动物的成体细胞为小鼠胚胎成纤维细胞，所述诱导培养基包括DMEM高糖培养基、15%的胎牛血清、0.1mM非必需氨基酸，2mML-谷氨酰胺，1mM丙酮酸钠，55μMβ巯基乙醇，50U/mL青霉素，50μg/mL链霉素和1000U/ml白血病抑制因子，所述转录因子为Oct4、Klf4和Sox2的组合或Oct4、Klf4、Sox2和C-Myc的组合。
2.如权利要求1所述的提高诱导生成多能性干细胞效率的方法，其特征在于，还包括步骤b：将诱导获得的多能性干细胞克隆在干细胞培养基中培养扩增，所述干细胞培养基为步骤a所述诱导培养基。
3.根据权利要求2所述的提高诱导生成多能性干细胞效率的方法，其特征在于，所述将Jhdm1a转入哺乳动物的成体细胞是以包含能够表达Jhdm1a的载体导入细胞中来实现的。
4.根据权利要求3所述的提高诱导生成多能性干细胞效率的方法，其特征在于，所述载体为病毒载体、质粒载体。
5.根据权利要求4所述的提高诱导生成多能性干细胞效率的方法，其特征在于，所述病毒载体为逆转录病毒，所述逆转录病毒为pMXs载体。
6.一种提高诱导生成多能性干细胞效率的方法，其特征在于，包括如下步骤：
a、将转录因子与Jhdm1a转入哺乳动物的成体细胞，在诱导培养基中培养，诱导获得多能性干细胞克隆，所述哺乳动物的成体细胞为小鼠胚胎成纤维细胞，所述诱导培养基包括DMEM高糖培养基、15%的胎牛血清、0.1mM非必需氨基酸，2mML-谷氨酰胺，1mM丙酮酸钠，55μMβ巯基乙醇，50U/mL青霉素，50μg/mL链霉素，1000U/ml白血病抑制因子和50μg/mL维生素C，所述转录因子为单独的Oct4，或Oct4和Sox2的组合，或Oct4和Klf4的组合，或Oct4和Klf4和Sox2的组合，或Oct4、Klf4、Sox2和C-Myc的组合。
7.如权利要求6所述的提高诱导生成多能性干细胞效率的方法，其特征在于，还包括步骤b：将诱导获得的多能性干细胞克隆在干细胞培养基中培养扩增，所述干细胞培养基为步骤a所述诱导培养基。
8.根据权利要求7所述的提高诱导生成多能性干细胞效率的方法，其特征在于，所述将Jhdm1a转入哺乳动物的成体细胞是以包含能够表达Jhdm1a的载体导入细胞中来实现的。
9.根据权利要求8所述的提高诱导生成多能性干细胞效率的方法，其特征在于，所述载体为病毒载体、质粒载体。
10.根据权利要求9所述的提高诱导生成多能性干细胞效率的方法，其特征在于，所述病毒载体为逆转录病毒，所述逆转录病毒为pMXs载体。
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