[发明专利]制备模块融合蛋白表达产物的方法

权利要求书

1.一种载体，其含有以下每一种元件，这些元件顺次排列而形成模块型开放读框，所述载体包含：

a)编码第一组氨基酸的第一限制性位点，其中此第一组氨基酸包括至少两个氨基酸；

b)编码感兴趣多肽的第一开放读框，其中此感兴趣多肽的编码序列与上述第一限制位点的至少两个氨基酸的编码序列同在框内；

c)编码第二组氨基酸的第二限制性位点，其中此第二组氨基酸包括至少两个氨基酸，其中上述第二限制性位点的第二组氨基酸编码序列与上述第一开放读框的感兴趣多肽编码序列同在框内，其中上述第二限制性位点的多核苷酸序列与第一限制性位点的多核苷酸序列不同；

d)间隔臂多核苷酸序列，其中此间隔臂多核苷酸序列编码至少3个间隔氨基酸，其中此间隔臂序列的编码序列与上述第二限制性位点的多核苷酸序列同在框内；和

e)编码第三组氨基酸的第三限制性位点，其中此第三组氨基酸包括至少两个氨基酸，其中上述第三限制性位点的第三组氨基酸编码序列与上述至少3个间隔氨基酸的编码序列同在框内，其中上述第三限制性位点的多核苷酸序列与第一限制性位点的多核苷酸序列不同，并且第三限制性位点与第二限制性位点的多核苷酸序列不同；

其中元件(a)-(e)彼此同框相连从而形成模块型开放读框。

2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述第一限制性位点易受限制性酶作用而产生含有至少2个核苷酸的第一单链突出端，所述第二限制性位点易受限制性酶作用而产生含有至少2个核苷酸的第二单链突出端，其中所述第一和第二突出端彼此互补，从而使所述第一和第二突出端在合适条件下能彼此退火。

3.如权利要求2所述的载体，其特征在于，所述第一限制性位点包含NgoM IV限制性酶识别的多核苷酸序列。

4.如权利要求2所述的载体，其特征在于，所述第二限制性位点包含Xma I限制性酶识别的多核苷酸序列。

5.如权利要求4所述的载体，其特征在于，所述第三限制性位点包含CIa I限制性酶识别的多核苷酸序列。

6.如权利要求1所述的载体，其特征在于，还包含与所述模块型开放读框的5’部分操作性相连的启动子。

7.如权利要求6所述的载体，其特征在于，所述启动子是哺乳动物启动子。

8.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述第一开放读框与第二限制性位点之间插入了至少一个其它的开放读框，其中此至少一个其它的开放读框各自与所述第一开放读框和第二限制性组同在框内，其中所述其它的开放读框各自编码至少一种其它的感兴趣多肽。

9.如权利要求8所述的载体，其特征在于，所述载体包含至少两个开放读框。

10.如权利要求9所述的载体，其特征在于，所述载体包含至少3个开放读框。

11.一种制备融合多肽的方法，包括，

a)用识别第二和第三限制性位点的限制性酶消化权利要求6所述的载体，从而产生含有第一和第二单链突出端的线形载体，其中该第一和第二突出端彼此不相容；

b)提供第一插入物，其中此第一插入物包含至少一个其它的开放读框，其中此至少一个其它的开放读框包含与所述第一和第二个突出端相容的5’和3’突出端，其中此至少一个其它的开放读框各自编码至少一个其它的感兴趣多肽；

c)将第一插入物连接入所述线形载体，从而形成连接的表达载体，其中所述至少一个开放读框的5’突出端与所述线形载体的第一个单链突出端退火相连，其中所述至少一个开放读框的3’突出端与所述线形载体的第二个单链突出端退火相连，所述3’突出端的连接重新产生第三限制性位点，其中所述至少一个其它的开放读框与第一开放读框彼此同框相连。

12.一种制备融合多肽的方法，包括：

a)用识别第二和第三限制性位点的限制性酶消化如权利要求9所述的载体，从而产生含有第一和第二个单链突出端的线形载体，其中所述第一和第二突出端彼此不相容；

b)提供第一插入物，其中此第一插入物包含至少一个其它的开放读框，其中此至少一个其它的开放读框包含与所述第一和第二个突出端相容的5’和3’突出端，其中此至少一个其它的开放读框各自编码至少一个其它的感兴趣多肽；

c)将第一插入物连接入所述线形载体，从而形成连接的表达载体，其中所述至少一个开放读框的5’突出端与所述线形载体的第一个单链突出端退火相连，其中所述至少一个开放读框的3’突出端与所述线形载体的第二个单链突出端退火相连，其中所述3’突出端的连接重新产生第三限制性位点，

其中所述至少一个其它的开放读框与第一开放读框彼此同框相连。