[发明专利]一种草莓类胡萝卜素成分的含量测定方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种草莓类胡萝卜素成分的含量测定方法。

【背景技术】

草莓(Fragaria ananassa Duch）属蔷薇科多年生草本植物，果实鲜美红嫩，浓郁多汁，果味芳香并且营养丰富，素有“水果皇后”之称。近年来，随着草莓经济价值的日益走俏，人们开始越来越重视草莓的果实品质。类胡萝卜素（Carotenoids）既是决定水果、蔬菜内在营养品质的重要指标，也是影响果实外观品质和花卉观赏价值的重要因素。越来越多的医学研究表明，除了不少类胡萝卜素是维生素A的前体外，许多类胡萝卜素在猝灭自由基、增强人体免疫力、预防心血管疾病和防癌抗癌等保护人类健康方面起着重要的作用。目前草莓类胡萝卜素提取和测定尚未见报道，缺少准确可靠的检测方法，因此建立一种快速、准确的测定方法对研究草莓果实类胡萝卜素积累规律、合理开发和利用我国草莓资源具有重要的理论价值和应用前景。

检测植物中类胡萝卜素的方法有纸层析法、柱层析法、薄层层析法、膜层析法和高效液相色谱法。超高效液相色谱(Ultra performance liquid chromatography,UPLC)是近几年推出的一种新的液相色谱技术，相较于传统的分析方法带来的分辨率限制、操作繁杂、无法检测到更多种类的类胡萝卜素的缺点，UPLC以更短的填料色谱柱，耐受超高压（40mpa）色谱泵和色谱系统，使分离速度、灵敏度、分离度达到普通HPLC的9、3、1.7倍，体现出明显的超高选择性、超高分离度、超高灵敏度以及超高速等优势，在蛋白组学、代谢组学、天然产物、环境监测等众多高端领域得到应用。利用UPLC测定草莓类胡萝卜素含量国内外还未见报道。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题，在于提供一种草莓类胡萝卜素成分的含量测定方法，该测定方法简单快速，结果准确可靠。

本发明是这样实现的：

一种草莓类胡萝卜素成分的含量测定方法，采用超高效液相色谱法在同一色谱条件下对草莓果实中的4种分别为叶黄素、β-胡萝卜素、β-隐黄质以及番茄红素的类胡萝卜素成分同时进行含量测定；该方法包括如下步骤：

（1）制备对照品溶液:分别称取叶黄素、β-胡萝卜素、β-隐黄质、番茄红素对照品，加丙酮得到四种单个对照品溶液；再分别精密量取四种单个对照品溶液，置同一容量瓶中，得到混合对照品溶液；

（2）制备供试品溶液:精密称定草莓果肉，用液氮快速研磨至粉末状，置具塞锥形瓶中，精密加入丙酮：石油醚=1：2提取剂，于50℃下，避光浸提3小时，过滤出上清液；残渣反复浸提至残渣发白，合并上清液，用旋转蒸发仪40℃蒸至糊状；加入石油醚和10%KOH-甲醇，避光，室温萃取，皂化过夜；然后过滤，将滤液转入250ml分液漏斗中，并将分液漏斗下层的皂化液转入锥形瓶，用石油醚反复萃取皂化液至石油醚层为无色，接着合并石油醚层至另一250ml分液漏斗中，用双蒸水反复洗涤石油醚层，去残余的丙酮至双蒸水层为中性，继续加入无水硫酸钠脱水后旋转蒸发仪40℃蒸干，最后用丙酮定容，即得；

（3）制定色谱条件:

仪器：WATERS ACQUITY UPLC H-Class超高效液相色谱；

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18规格为2.1mm×50mm,1.7u m的色谱柱；

流动相：乙腈与甲醇；

流动相流速：0.5ml/min；

检测波长：450nm；

进样体积：5ul；

柱温：27℃；

（4）进行常规系统适应性试验，注入超高效液相色谱仪进行叶黄素、β-胡萝卜素、β-隐黄质以及番茄红素含量测定。

进一步地，流动相各组分的体积比为乙腈：甲醇=9:1。

进一步地，步骤（1）对照品溶液的制备为：分别精密称取叶黄素、β-胡萝卜素、β-隐黄质、番茄红素对照品各1.0mg，加丙酮定容于5ml容量瓶中，得到浓度为200ug/ml单个对照品溶液；分别精密量取单个对照品溶液，置同一容量瓶，得到混合对照品溶液。

进一步地，步骤（2）中加入的丙酮、石油醚以及10%KOH-甲醇中均含0.1%BHT。

本发明具有如下优点：