[发明专利]一种大豆肽的酶法制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及大豆肽的制备工艺，特别是指一种大豆肽的酶法制备方法。

背景技术

利用大豆蛋白经酶水解后，得到由多种肽分子组成的混合水解产物，称其为大豆肽。大豆肽与大豆蛋白具有完全相同的氨基酸组成，一般由2～10个氨基酸残基构成，必需氨基酸平衡良好。与大豆蛋白相比，大豆肽具备良好的加工特性和独特的生理活性，可用于多种食品乃至化妆品的生产中。

大豆蛋白水解物的研究最初采用酸碱化学试剂在一定温度下进行水解反应，但在研究中发现，化学法制备大豆肽存在种种弊端，如水解过程不易控制、水解无特异性、副反应多、营养成分损失及水解产物感官性能差、苦臭味等问题未能解决等，大豆低聚肽的研究进展缓慢。

随着酶学工业的发展，酶法水解大豆蛋白逐渐成为了研究的主流。酶法制备大豆多肽的工艺条件一般都比较温和，但因酶理化特性的差异，其反应条件必须限制在某个最适温度和pH范围内，否则酶就会失活，而且不同酶水解时的作用位点和作用机理也不一样。如国内外研究最多的Alcalase是一种非特异性碱性蛋白酶，属于内切酶，主要作用于含疏水性羧基的肽键，催化部位是丝氨酸；复合蛋白酶Protamex的活性中心是丝氨酸残基，同时具有内切酶和外切酶的特性，在大豆肽酶解中使用较多；研究发现，Flavourzyme复合风味蛋白酶可减少疏水性氨基酸所引起的苦味，可以使大豆肽在食品工业生产中获得更为广泛的应用，近年来，国内对大豆肽的有关生产工艺也有所发展，一般的制备方法为利用完全脱腥大豆蛋白粉作为原料，使用Asl．398蛋白酶、胰蛋白酶、菠萝蛋白酶中的一种，于30-50℃、不同pH下处理，取上清液再与氨基酸、蛋白质等复合成氨基酸口服液；采用中性蛋白酶Asl.398与木瓜蛋白酶双酶复合水解的方法，可获得比单独使用一种酶更高的水解度，获得分子量在2000以下的大豆肽；采用胰蛋白酶与中性蛋白酶Asl．398复合水解大豆分离蛋白，也获得了良好的效果，水解度可达到30％以上，大豆肽平均链长为2-4个氨基酸，相对分子量小于1000，但是，常规的采用单一酶法水解的水解度通常较低，为40-50%，虽然多酶水解能有一定提高，但仍然有限，而且多酶水解对于工艺条件的控制要求更加严格。

蚯蚓丝氨酸蛋白酶是从蚯蚓体内提取得到的一种酸性蛋白酶，属于胰蛋白酶，它能水解蛋白质底物（如酪蛋白），碱性氨基酸的酯及酰胺。PI3-4；20-50℃范围稳定；是一种糖蛋白酶类。

蚯蚓丝氨酸蛋白酶作为一组蛋白水解酶，对其酶学性质的研究还不够深入。多数蚯蚓丝氨酸蛋白酶组分受3种丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲磺酰氟、甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲基酮、N-对甲苯磺酰赖氨酰氯甲基酮的抑制，但不同组分对不同种类的蛋白酶抑制剂的敏感性存在差异；蚯蚓丝氨酸蛋白酶直接切割纤溶酶原及降解纤维蛋白原是其同时具有激酶和纤溶酶活性的分子基础；对不同合成底物具有专一性说明其具有不同活性中心；蚯蚓丝氨酸蛋白酶能对组织纤溶酶原激活剂(t-P A)的专一性底物S-2288有水解作用，说明其对纤溶酶原的激活方式与t-P A相似。

发明内容

本发明提出一种大豆肽的酶法制备方法，极大的提高了水解的效率，同时得到的产物分离更加彻底，收率高。

本发明的技术方案是这样实现的：一种大豆肽的酶法制备方法，包括以下步骤：

（1）称取植物蛋白，按照物料比1:20至1:60（w/v）加入纯化水，75-85℃灭菌20-40min，冷却至40℃；

（2）按植物蛋白重量0.5-2‰加入蚯蚓丝氨酸蛋白酶；

（3）酶解工艺条件：通过缓冲液使得PH控制在6.0-7.8的范围内，37-42℃保温水解20-30h，75-85℃灭活30min，然后进行过滤，取过滤清液；

（4）使用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，补加2-3次纯化水继续超滤；

（5）将超滤透出液进行干燥，得大豆肽粉。

优选的，步骤（1）中，所述物料比为1:40，灭菌温度为80℃，30min。温度如果过高容易导致蛋白质的变性。

优选的，步骤（2）中，加入蚯蚓丝氨酸蛋白酶的重量为植物蛋白重量的1‰。

优选的，步骤（3）中，PH控制在6.5，保温水解的温度为40℃，水解24h，灭活温度为80℃。

优选的，步骤（3）中，所述过滤步骤包括：多层纱布过滤，取过滤清液；滤饼再加入纯化水洗涤，多层纱布过滤，将两次过滤清液合并；